人脂肪源干细胞在促进兔前交叉韧带重建术后腱骨界面愈合的实验研究

发布时间：2019-03-20 16:20

【摘要】：研究目的:探讨移植人脂肪源干细胞能否促进前交叉韧带重建术后腱骨界面的愈合。研究方法:将48只体重2.5-3.Okg的雌性新西兰大白兔随机分为实验组和对照组,每组各24只。取同侧半腱肌作为供体肌腱,建立单侧下肢前交叉韧带重建动物模型,实验组和对照分别在胫骨和股骨隧道中注射hASCs和等量的生理盐水。分别在术后2、4和8周取材,收集胫骨-移植韧带-股骨标本行组织学和生物力学检测。统计学分析本实验所得数据以均数±标准差(mean±SD)表示,运用SPSS20.0软件,采用两独立样本t检验检测各数据间的统计学差异,P0.05表示为差异具有统计学意义。研究结果:1.人脂肪源干细胞的鉴定流式细胞结果显示本实验所用细胞表面抗体CD90(99.5%),,CD51(96.8%),CD105(91.1%)为阳性表达;CD34(10.6%),CD45(10.7%),CD49e(12.2%)为阴性表达。2.ALP染色结果碱性磷酸酶染色结果表明实验组阳性染色较对照组阳性染色明显,通过软件Image-pro plus6.0对染色图片进行半定量分析,半定量结果显示实验组单位面积上累计光密度值(IOD/Area)较对照组显著增高且具有统计学差异(P=0.0257)。3.qRT-PCR检测相关成骨基因的表达与对照组相比,OCN基因表达无统计学意义,OPN基因表达是对照组的6.8倍(P=0.018),RUNX2基因表达是对照组的2.6倍(P=0.015),ALP基因表达是对照3.1倍(P=0.019),Collagen-1基因表达是对照组的4.1倍(P=0.043)且都有统计学意义。4.组织学分析4.1 HE染色结果HE染色结果显示对照组术后2周腱骨界面主要以炎性细胞浸润为主,4周时减少,术后8周时在腱骨界面形成以纤维结缔组织为主的间接止点结构。实验组术后4周在腱骨界面可见少量纤维软骨细胞和骨细胞,术后8周时有新生骨形成,在腱骨界面处形成直结止点。4.2 Masson' s trichrome 染色结果Masson' s trichrome染色结果显示实验组与对照组术后2周时主要以炎性细胞浸润为主。实验组术后4周在腱骨界面处可见纤维软骨细胞及纤维结缔组织形成,术后8周实验组腱骨界面处可有新生骨及致密结缔组织形成而对照组无新生骨形成。5.生物力学分析从生物力学数据分析可知,术后2周实验组最大载荷(21.02±8.30 N vs 12.36±7.67N,p=0.09)大于空白对照组,但无统计学差异。术后4周(87.52±10.29N vs 14.76±4.1ON,P0.01)、8 周(126.31±12.85 N vs 47.0±12.81N,P0.01)实验组最大载荷均大于空白对照组且均有统计学差异。术后 2 周(9.76±5.07N/mm vs 7.85 ± 4.11N/mm,P=0.49)、8 周(37.18 ±5.62N/mm vs 30.28±23.86 N/mmm,P=0.51)实验组移植肌腱刚度大于空白对照组移植肌腱的的刚度,但都无统计学差异。在术后4周时(27.80±7.24N/mmm vs 8.98±4.12,P0.01),实验组移植肌腱的刚度大于空白对照组且有统计学差异。研究结论1.hASCs在体外成骨诱导环境下可向成骨方向分化,具有一定的成骨能力2.组织学染色结果显示人脂肪源干细胞能促进腱骨界面的骨化,促进腱骨界面向直接止点转化3.在腱骨界面移植经成骨诱导分化的人脂肪源干细胞能增强腱骨界面的生物力学性能,具有一定能的临床应用潜能。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R687.4

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本文编号：2444385