低氧预培养脂肪间充质干细胞复合小肠粘膜下层构建组织工程肌腱修复大鼠跟腱缺损的实验研究

发布时间：2019-03-23 20:49

【摘要】：目的:体外研究已证实低氧培养脂肪间充质干细胞(ADMSCs)可以提高它的的生存能力以及向肌腱细胞分化的潜能,本研究通过对ADMSCs经低氧预培养后再复合小肠粘膜下层(SIS)修复大鼠跟腱缺损的体内研究探讨ADMSCs复合SIS构建组织工程肌腱修复肌腱缺损的可能性,并进一步探讨低氧是否能促进ADMSCs复合SIS治疗肌腱缺损的治疗效果,为治疗肌腱损伤提供一种新的理论依据。方法:从Sprague-Dawley大鼠的脂肪组织分离、提取ADMSCs,并对其进行纯化、传代培养,将第3代ADMSCs采用流式细胞仪检测ADMSCs表面标志物的表达。将第3代ADMSCs分成两组,分别置于常氧(20%02)与低氧(2%02)培养箱中培养7天,然后采用CM-DiI标记两组细胞,再将标记的ADMSCs复合SIS后在常氧条件下培养48小时。选取50只(250—300g)雄性SD大鼠,随机选取30只分成A、B、C三组,每组10只,剩余20只大鼠左侧跟腱记为D租,右侧跟腱记为E组。将A组作为假手术组,将B、C、D、E四组大鼠双侧跟腱的外侧束与后束去掉约0.5cm,作为大鼠跟腱缺损的模型,其中将B组作为自体肌腱移植组、C组作为单纯SIS组、D组作为常氧ADMSCs复合SIS组、E组作为低氧ADMSCs复合SIS组,采用改良的Kessler缝合法将自体离断的跟腱或SIS缝在缺损的跟腱上,然后将所有实验组双腿行石膏外固定,四周后观察移植段的大体情况,并进行HE、masson染色、免疫组织化学检查、图像分析以及生物力学测试。结果:(1)术后4周移植段he染色结果显示:a组可见肌腱细胞稀少且呈细小长梭形,肌腱胶原纤维呈致密波浪状并朝一个方向排列;b组可见大量成纤维细胞,细胞外基质排列顺序紊乱;c组、d组以及e组的sis上均有长梭形细胞沿着细胞外基质朝一个方向有规律的排列,e组中长梭形细胞数的比例高于c、d两组,但d组的长梭形细胞数却高于c组,c、d、e三组中,e组的细胞外基质最多,但d组的细胞外基质却多于c组。(2)4周后masson染色显示:a组胶原纤维呈蓝色,细胞质呈红色,细胞核呈黑色,可见少量的梭形细胞沿胶原纤维方向排列;b组可见大量沿胶原纤维排列的梭形细胞,但胶原纤维呈无规则排列;c组、d组以及e组均有不同数量的长梭形细胞沿着胶原纤维朝一个方向有规律的排列,e组胶原纤维的沉积量最大、且排列顺序最整齐,但d组胶原纤维的沉积量以及排列顺序要优于c组。(3)d组与e组移植段免疫组织化学检查显示:d组与e组的长梭形细胞和椭圆形细胞中均有大量的腱调蛋白(tnmd)蛋白以及mkx(mohawkhomeobox)蛋白表达,通过对mkx蛋白表达阳性细胞数分析,e组中表达mkx阳性细胞数要明显高于d组(p0.05)。以上结果表明e组移植段比d组更易塑造成肌腱样组织。(4)d组与e组移植段admscs检测与mkx免疫荧光化学染色检查显示:d组与e组均有大量的admscs存在,并且e组表达mkx蛋白阳性admscs的数量比例要高于d组(p0.05)。(5)4周后生物力学测试显示:e组破坏力(32.34±2.71)n要高于c组(20.33±1.47)n及d组(27.78±2.11)n(p0.05),e组最接近b组(37.62±1.54)n(p0.05),而d组高于c组(p0.05)。结论:(1)admscs复合sis构建组织工程肌腱修复肌腱缺损的治疗效果要优于单纯利用SIS修复。(2)低氧可以促进ADMSCs复合SIS治疗肌腱缺损的治疗效果。(3)附在SIS上的ADMSCs可能分化成了肌腱样细胞,并且低氧对ADMSCs向肌腱样细胞分化可能起到了促进作用。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：西南医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R687.2

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本文编号：2446217