Atsttrin工程化的小鼠间充质干细胞在骨关节炎中的治疗效应及机制研究

发布时间：2019-09-18 06:58

【摘要】：背景： 骨关节炎(Osteoarthritis, OA)的治疗是临床上的巨大挑战。机械损伤、肥胖、运动不当等都可能导致骨关节炎。骨关节炎在60岁以上的人群中发病率已经达到了10%,但是在临床上仅有少量的药物能缓解症状,其中多数为止痛药。骨关节炎的病理过程包括软骨表面磨损、软骨基质的降解,炎性水平的升高等。肿瘤坏死因子(TNFa)是导致OA病理过程的重要因素之一。Atsttrin蛋白来源于颗粒蛋白前体(Progranulin, PGRN)的三个有效片段,能够与TNFa受体(TNFR)结合进而拮抗TNFa引起的炎症反应,具有较PGRN更强的结合TNFR的能力以及更显著的炎症治疗效果。因此,我们拟研究过表达Atsttrin蛋白的小鼠间充质干细胞在骨关节炎中的治疗作用及其潜在机制。 方法：构建过表达Atsttrin蛋白的小鼠干细胞系(MSC-Atsttrin),并与人软骨细胞(hAC)体外共培养。TNFa处理后检测相关基因的表达变化。构建小鼠关节腔韧带切断导致的骨关节炎模型(ACLT-OA),通过关节腔内注射MSC-GFP/Atsttrin治疗,观察骨关节炎进展程度。 结果：TNFa在人和鼠的OA关节软骨中呈现高表达。TNFa处理使人软骨细胞MMP13,ADAMTS-5等基因的mRNA表达水平显著升高。而MSC-Atsttrin与之共培养后能有效的拮抗TNFa病理反应。体内结果显示,相对于正常组样本,OA模型构建后关节软骨呈现明显的软骨表层磨损、软骨基质降解及OARIS评分升高。MSC-Atsttrin注射组骨关节软骨退行性病变明显减缓。 结论：Atsttrin过表达的小鼠间充质干细胞在OA中具有较显著的治疗效果。
【图文】：

浙江大学硕+学位论文 实验结果3实验结果3.1 TNFa在OA病理组织中蛋白水平的表达为了检测TNFa在OA病理组织中的表达，我们收集了人和小l#正常关节软骨和OA病理关节软骨（鼠的OA样本为造模后8周，n=3),分别做了免疫组化实验。结果如图1、2所示，在人和鼠的关节样本中，相对于正常组，OA病理环境中的关节软骨的TNFa的表达均明显升高，阳性细胞计数对比分别是(39.17±1.4%VS 60.47±1.8o/o,尸<0.01)，(32.75±8.3% vs 77.84±5.9%,/7<0.001)oA B

江大学硕十学位论文 实验结果图2. TNFa在l#正常和OA关节软骨中的表达：（A、B)是昆正常软骨样本切片染色结果，标尺长度分别为200 jum、lOOMm,结果表明TNFa的表达接近于无；(C、D)是鼠OA软骨样本切片染色结果，标尺长度分别为200 M m、100 pm,果表明TNFa的表达相对于正常组明显升高；（E)是相应阳性细胞统计图。3.2 TNFa在OA病理组织中mRNA水平的表达为了检测TNFa在OA病理组织中mRNA水平的表达，我们收集了人和小正常关节软骨和OA病理关节软骨（小鼠的OA样本为造模后4周和8周样本，，n=3)。RNA提取过程见实验步骤。结果显示如图3所示，在人和鼠的关节样本中，相对于正常组，OA病理环境关节软骨中TNFa的RNA表达均显著升高，尤其是鼠造模后8周的样本。
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R684.3

【共引文献】

相关期刊论文 前10条

1 周宇飞;周峻岗;袁汉英;吕红;;人超氧化物歧化酶-胸腺素α1融合蛋白在毕赤酵母中的表达与活性检测[J];复旦学报(自然科学版);2011年02期

2 周江涛,刘献祥;骨性关节炎与白细胞介素-1β[J];福建中医学院学报;2004年03期

3 陆斌,汤亭亭;骨关节炎发病机制中的免疫学因素[J];国外医学(骨科学分册);2004年01期

4 蔡伟平,汤亭亭;骨关节炎的细胞生物学研究进展[J];国外医学(骨科学分册);2004年01期

5 张晓敏;郭恪;任春霞;闫嘉晴;林崇韬;;牙周炎骨丧失机制中关于炎症和解偶联的研究[J];国际口腔医学杂志;2013年02期

6 陈家平;张杰;;小针刀联合钻孔减压术治疗髌股关节炎的临床研究[J];中医药临床杂志;2013年10期

7 黄淑婷;徐建华;丁长海;;炎症细胞因子及力学因素在膝骨关节炎发病机制和关节结构改变中的作用[J];安徽医学;2013年09期

8 陈家平;张杰;;小针刀配合钻孔减压术治疗跟痛症的疗效观察[J];安徽医药;2014年04期

9 陈朝阳;;针刺疗法配合中药外敷与封闭疗法配合中药外敷治疗骨关节炎病的临床疗效比较[J];中国地方病防治杂志;2014年03期

10 邓敏;陈晨;瞿华;王行;魏慧丽;邓华聪;;肥胖及2型糖尿病患者血浆CTRP3水平与胰岛素抵抗相关因素的研究[J];第三军医大学学报;2014年15期

相关会议论文 前4条

1 陈益丹;邱华平;金肖青;方剑乔;俞迈红;诸剑芳;;针刺、温针灸、电针对膝骨关节炎模型软骨代谢相关因子影响的实验研究[A];2011中国针灸学会年会论文集（摘要）[C];2011年

2 陈益丹;邱华平;金肖青;俞迈红;诸剑芳;;针刺对兔膝骨关节炎动物模型血清IL-1β、TNF-α的影响[A];中国针灸学会2009学术年会论文集（下集）[C];2009年

3 徐智仪;高晓强;王海;张科技;陈旭;邓怀明;;早期膝关节骨性关节炎康复治疗体会[A];2013浙江省物理医学与康复学学术年会暨第八届浙江省康复医学发展论坛论文集[C];2013年

4 ;The anti-hyperuricemia and xanthine oxidase inhibition effects of chrysoeriol, a component from Apium graveolens L. seeds[A];2012年中国药学大会暨第十二届中国药师周论文集[C];2012年

相关博士学位论文 前10条

1 韩清民;膝骨关节炎软骨病理改变的分子生物学机制及中药干预研究[D];广州中医药大学;2006年

2 周琦石;骨炎定对一氧化氮抑制人类软骨细胞Ⅱ型胶原合成的影响[D];广州中医药大学;2006年

3 周斌;关节康治疗膝骨性关节炎的实验与临床研究[D];广州中医药大学;2006年

4 王培民;膝宁方治疗膝关节骨关节炎肝肾亏虚证的临床研究[D];南京中医药大学;2005年

5 钟玉;复元胶囊对实验性骨关节炎的软骨保护作用研究[D];重庆医科大学;2007年

6 林木南;OA护膝防治膝骨性关节炎的实验研究[D];福建中医学院;2008年

7 任志伟;MAPKs通路在兔骨关节炎软骨细胞表达MMP-1/-13中作用的研究[D];复旦大学;2008年

8 侯德才;人类原发性膝关节骨性关节炎病变滑膜全基因组表达与分析[D];辽宁中医药大学;2008年

9 任婕;消痹灵注射液对退行性骨关节炎的防治作用及其机理研究[D];湖北中医学院;2009年

10 王兵;基因工程菌E.coli pET28a（+）-PAW的构建及其转化废弃物产生物柴油的研究[D];浙江大学;2012年

相关硕士学位论文 前10条

1 韩波;L-CVN的中试发酵及其初步毒性和免疫原性研究[D];暨南大学;2011年

2 孔扬;联合基因治疗骨关节炎：IL-1Ra联合自杀基因HSV-tk体外转染滑膜细胞促使炎性介质释放减少并抑制过度增生的滑膜细胞[D];山东大学;2011年

3 段鑫;缺氧诱导因子-1α在人关节滑膜组织中表达及转染HIF-1α后滑膜细胞功能及形态研究[D];南方医科大学;2011年

4 周江涛;透骨消痛颗粒防治骨性关节炎的实验研究[D];福建中医学院;2005年

5 郭艾军;骨关节炎相关因素研究[D];广西医科大学;2006年

6 崔长存;中西医结合治疗膝骨关节炎的临床观察[D];北京中医药大学;2009年

7 吴世栋;白介素-7及基质金属蛋白酶-13在骨关节炎中的表达及意义[D];宁夏医科大学;2009年

8 王晓慧;黑曲霉硫氧还蛋白体系基因的克隆、鉴定、融合及其在食品工程中的应用[D];浙江大学;2010年

9 陈伟;LCVN的可溶性表达及其N-末端特异性PEG修饰[D];暨南大学;2010年

10 寒桦;BMI与膝关节软骨滑膜损伤程度之间的联系[D];山西医科大学;2010年

本文编号：2537388