阻断Kupffer细胞TIM-4诱导iTreg细胞的产生影响小鼠肝移植免疫耐受

发布时间：2019-10-18 13:11

【摘要】：目的探讨阻断Kupffer细胞(Kupffer cells,KCs)T细胞免疫球蛋白黏蛋白4(T-cell immunoglobulin and mucin-domain-containing molecule 4,TIM-4)诱导小鼠原位肝移植术后i Treg细胞的产生及其相关机制。方法建立小鼠原位肝移植急性排斥反应模型,分为sham组、control m Ab组、TIM-4 m Ab组。流式细胞仪检测KCs活化,Western blot检测肝脏TIM-4表达,TUNEL检测肝细胞凋亡指数(apoptotic index,AI)。提取KCs,激光共聚焦检测KCs TIM-4表达,将KCs和提取的初始CD4+T细胞进行共培养,激光共聚焦检测Kupffer细胞TIM-4表达,分为control组、control m Ab组以及TIM-4 m Ab组;CFSE检测CD4+T细胞增殖,流式细胞仪检测CD4+CD25+Foxp3+T细胞,ELISA检测IL-4、IL-6、IL-13水平,Western blot检测STAT6表达。建立小鼠移植模型,分为3组:i Treg组移植模型注入i Treg细胞(预先用TIM-4 m Ab处理的TIM-4+KCs与初始CD4+T细胞共培养所诱导),sham组和单纯肝移植组(LT)注入相应的PBS作为对照,检测各组AST、ALT、TBIL水平,HE染色评价肝组织排斥活动指数(rejective activity index,RAI),观察小鼠生存率。结果肝移植术后24、48、72 h KCs的活化分别为15.9%、21.6%、28.3%,术后1、3、7 d TIM-4蛋白表达水平明显高于sham组(P0.05);control m Ab组AI值(29.23±2.56)明显高于sham组和TIM-4 m Ab组[(0.40±0.49),(11.04±2.28),P0.05]。KCs与CD4+T细胞共培养后,control、control m Ab以及TIM-4 m Ab组CD4+T细胞的增殖率分别为32.5%、31.6%、17.2%,CD4+CD25+Foxp3+T细胞分化分别为12.4%、13.9%、28.1%,共培养上清液TIM-4 m Ab组IL-4、IL-6、IL-13分泌水平明显低于control m Ab(P0.05),且加入TIM-4 m Ab明显降低了与TIM-4+KCs共培养的CD4+T细胞p-STAT6蛋白表达(P0.05),外源性加入IL-4可明显增高CD4+T细胞p-STAT6蛋白的表达(P0.05)。移植模型注入i Treg细胞,i Tregz组肝功指标明显好转,与LT组比较差异有统计学意义(P0.05)。肝组织病理学检查,i Treg组RAI平均得分为(3.97±0.67),明显低于LT组[(8.47±0.90),P0.05],且i Treg组小鼠平均存活时间延长。结论阻断KCs TIM-4能够抑制初始CD4+T细胞IL-4/STAT6信号通路的激活,从而诱导更多i Treg细胞的生成,致使宿主对移植物产生免疫耐受。
【图文】：

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本文编号：2551104