FRNK对瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的影响

发布时间：2019-11-09 09:36

【摘要】：目的应用脂质体介导黏着斑激酶相关非激酶(FRNK)表达质粒转染瘢痕疙瘩成纤维细胞,探讨FRNK抑制黏着斑激酶(FAK)磷酸化对瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的影响,及其与FAK-ERK信号转导通路、Ⅰ型胶原α1链(COL1A1)和Ⅲ型胶原α1链(COL3A1)之间的关系。方法(1)用Western blotting及RT-PCR检测正常皮肤和瘢痕疙瘩中FRNK蛋白及m RNA水平;(2)应用体外细胞培养技术,培养瘢痕疙瘩成纤维细胞,在脂质体介导下用FRNK表达质粒瞬时转染瘢痕疙瘩成纤维细胞,用膜联蛋白/碘化丙啶双标记流式细胞术检测细胞的凋亡,用Western blotting检测FAK、p-FAK、FRNK、细胞外信号调节激酶1(ERK1)、细胞外信号调节激酶2(ERK2)、p-ERK1、p-ERK2等相关指标的蛋白质表达。用RT-PCR方法检测FAK、ERK、COL1A1、COL3A1等相关指标的m RNA表达。结果(1)瘢痕疙瘩组织块中的FRNK蛋白表达低于正常皮肤(0.14±0.08 vs 0.33±0.06),差异有显著意义(P0.05)。瘢痕疙瘩组织块中FRNK m RNA表达低于正常皮肤(0.30±0.04 vs 1.04±0.06),差异有显著意义(P0.05)。(2)FRNK表达质粒转染瘢痕疙瘩成纤维细胞于转染后48h FRNK蛋白含量达最高,72h表达下降。(3)与空质粒组相比,FRNK组FAK、ERK转录及翻译水平均下降,FAK及ERK磷酸化水平也均下降(P0.05)。(4)FRNK组与空质粒组相比,COL1A1、COL3A1 m RNA的表达水平均下降(0.23±0.10 vs 0.85±0.02,0.60±0.02 vs 1.06±0.10,P0.01),而空质粒组与对照组、脂质体组间无明显差别(P0.05)。(5)FRNK组细胞凋亡率明显高于对照组、脂质体组、空质粒组(36.63±4.89 vs 3.87±0.07 vs 3.62±0.54 vs 3.72±0.08,P0.05),而对照组、脂质体组、空质粒组之间无明显差别(P0.05)。结论(1)瘢痕疙瘩组织中,FRNK蛋白的减少导致其促进成纤维细胞(FBs)凋亡作用减弱;(2)瘢痕疙瘩中FRNK可能通过抑制FAK磷酸化及下调FAK活性,并下调FAK-ERK信号通路转导来促进细胞凋亡;(3)瘢痕疙瘩中FRNK促进纤维细胞凋亡,可能导致胶原的生成下降。
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R622

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