白细胞介素6对乳腺癌MCF-7细胞上皮间质转化和侵袭迁移的研究
发布时间：2019-11-11 10:59
【摘要】：目的：探讨IL-6对乳腺癌MCF-7细胞株上皮间质转化和侵袭迁移的影响,并初步探讨其作用机制。方法：1.MTT法检测不同浓度的IL-6(25、50、100ng/mL)处理组与对照组(Ong/mL)作用于乳腺癌MCF-7细胞24、48、72h后对细胞增殖的影响；2.细胞划痕实验观察经不同浓度的IL-6 (25、50、100ng/mL)处理48h后与对照组(Ong/mL)乳腺癌MCF-7细胞的体外迁移能力；3.运用Transwell小室侵袭实验检测经不同浓度的IL-6(25.50.100ng /mL)处理48h后与对照组(Ong/mL)乳腺癌MCF-7细胞的侵袭潜能；4.运用RT-PCR法检测经不同浓度的IL-6(25、50、100ng/mL)作用48h后与对照组(Ong/mL)乳腺癌MCF-7细胞中上皮间质转化相关标志物E-cadherin、Vimentin及侵袭迁移标志物MMP-9的mRNA水平；5. Western blot法检测经不同浓度的IL-6 (25、50、100ng/mL)作用48h后与对照组(Ong/mL)乳腺癌MCF-7细胞中上皮间质转化相关标志物E-cadherin、Vimentin及侵袭迁移标志物MMP-9的蛋白表达水平。6.采用免疫组织化学法检测入组乳腺癌患者肿瘤组织与癌旁正常组织内IL-6及上皮间质转化相关标志物E-cadherin、Vimentin的表达。结果：1.经不同浓度的IL-6 (25、50、100ng/mL)处理组的OD(490)值比对照组(0ng/mL)均有增加,且伴随IL-6浓度的增大与作用时间的延长,表现出量效-时效关系(P0.05)。2.经不同浓度的IL-6(25、50、100ng/ml)处理48h后乳腺癌MCF-7细胞的迁移距离分别为(18.97±0.31)、(.93±0.25)和(29.30±0.46)mm,而对照组(0 ng/mL)乳腺癌MCF-7细胞的迁移距离为(15.20±0.40)mm。不同浓度IL-6(25.50.100 ng/mL)处理组中乳腺癌MCF-7细胞迁移距离较对照组(0 ng/mL)中乳腺癌MCF-7细胞迁移距离明显增加,且随IL-6浓度增大,乳腺癌MCF-7细胞迁移距离增加,有统计学差异(P0.05)。3.经不同浓度的IL-6(25.50.100ng/mL)处理48h后穿过Matrigel胶的MCF-7细胞数分别为(43.00±3.61)、(68.00±3.00)和(84.33±2.52)个,而对照组(0 ng/mL)中穿过Matrigel胶的MCF-7细胞数为(28.00±2.65)个。不同浓度IL-6(25.50.100 ng/mL)处理组中穿过Matrigel胶的MCF-7细胞数量较对照组(0 ng/mL)中穿过Matrigel胶的MCF-7细胞数量明显增多,且随IL-6浓度增大,穿过Matrigel胶的MCF-7细胞数量越多,有统计学差异(P0.05)。4.经不同浓度的IL-6(25.50.100ng/mL)处理48h后,IL-6处理组中E-cadherin mRNA的相对表达量分别为0.76±0.074、0.52±0.087和0.45±0.048；Vimentin mRNA的相对表达量分别为1.15±0.111、2.71±0.096和3.11±0.200；MMP.9 mRNA的相对表达量分别为1.23±0.039、2.25±0.170和3.59±0.261。与对照组(0ng/mL)相比较,经不同浓度IL-6处理后的乳腺癌MCF-7细胞中E-cadherin mRNA表达均降低(P0.05),而Vimentin和MMP-9 mRNA表达增高(P0.05)。5.经不同浓度的IL-6(25.50.100ng/mL)处理48h后,IL-6处理组中E-cadherin蛋白的相对表达量分别为3.45±0.340、2.58±0.141和2.04±0.172:Vimentin蛋白的相对表达量分别为2.08±0.121、2.46±0.068和3.22±0.520；MMP-9蛋白的相对表达量分别为1.03±0.214、1.90±0.145和2.22±0.191。与对照组(Ong/mL)相比较,经不同浓度IL-6处理后的乳腺癌MCF-7细胞中E-cadherin蛋白表达均降低(P0.05),而Vimentin和MMP-9蛋白表达均增高(P0.05)。6. IL-6、E-cadherin、Vimentin在乳腺癌组织中表达高于癌旁正常组织；IL-6、E-cadherin、Vimentin均与肿瘤大小、TNM分期、组织学分级、腋窝淋巴结转移、ER、PR密切相关(P0.05),均与年龄及绝经与否无关(P0.05)。有腋窝淋巴结转移者、TNM分期高、组织学级别高、ER、PR阴性表达的乳腺癌患者的癌细胞内IL-6、Vimentin阳性表达率增高,E-cadherin阳性表达率降低(P0.05)。结论：在细胞形态变化以及相关基因转录和翻译水平上证明,IL-6能够诱导乳腺癌发生EMT,并促进乳腺癌MCF-7细胞体外增殖和侵袭迁移。
【图文】：
图３－１邋：对照组与ＩＬ－６处理后ＭＣＦ－７细胞形态Ｘ４０邋逡逑
？‘逦}0胞划痕实验结果如图３－２、图３－３所示。经不同浓度的比７６邋（２５、邋，逡逑５０、ｌＯＯｎｇ／ｍｌ）处理４８ｈ后s侔停茫疲废赴那ㄒ凭嗬敕直鹞ǎ保福梗峰义，
本文编号：2559228
【图文】：
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