多西他赛对含有H1047R突变的三阴性乳腺癌的作用

发布时间：2020-03-29 22:23

【摘要】：目的:1.对比含有H1047R(PIK3CA20号外显子)突变的三阴性乳腺癌(TNBC)细胞与含有PIK3CA野生型(WT)的TNBC细胞以及阴性病毒(GFP)的TNBC细胞的生长特性的异同,了解H1047R突变对三阴性乳腺癌细胞的影响,并进一步探讨其作用机制。2.研究紫杉醇类化疗药物多西他赛对含有H1047R突变的TNBC细胞体内、体外的抑制作用及其潜在的机制。方法:1.构建PIK3CA-H1047R突变、WT型及GFP型MDA-MB-231细胞株,通过CCK8细胞增殖实验检测细胞增殖、Transwell实验评价细胞侵袭能力、流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡、Western Blot检测PIK3CA突变对PI3K/Akt/mTOR细胞信号通路的影响、小鼠成瘤实验评价含有H1047R突变的细胞的成瘤作用。2.通过应用0.1%的多西他赛作用于WT、H1047R、GFP的MDA-MB-231细胞株,通过体外实验检测PIK3CA突变对细胞增殖、侵袭能力、细胞周期、细胞凋亡以及PI3K/Akt/mTOR细胞信号通路的影响,体内实验评价多西他赛对细胞成瘤的影响。结果:1.通过CCK8细胞增殖实验、Transwell细胞侵袭实验、细胞周期与凋亡实验发现,含有H1047R突变的MDA-MB-231细胞增殖能力、侵袭能力更强,分裂期细胞增多,细胞早期凋亡增多,与WT组和GFP组对比均有显著差异。Western Blot结果显示,H1047R突变细胞内磷酸化Akt和mTOR表达水平高于野生型组和病毒阴性对照组。2.成瘤结果显示,H1047R突变细胞成瘤能力最强,形成的肿瘤体积最大,但与其他两组比较无显著性差异。3,加入0.1%的多西他赛后,体外实验提示多西他赛能显著抑制H1047R突变细胞增殖、侵袭能力,阻滞细胞于G2/M期,并促进细胞的凋亡,抑制H1047R突变细胞内磷酸化Akt和mTOR的表达。4.体内实验显示,用药后病毒对照组和突变组肿瘤都有缩小,而野生型组肿瘤大小变化不明显,但三组之间并无显著性差异。结论:1.含有H1047R突变的MDA-MB-231细胞增殖、侵袭性增强,处于分裂期的细胞增多,早期凋亡增加,并显著增加Akt和mTOR的磷酸化,提示含有H1047R突变的TNBC肿瘤生长、转移的能力较强;2.多西他赛能显著抑制含有H1047R突变的MDA-MB-231细胞增殖和迁移,并能使细胞阻断在G2/M期,增加早期和晚期凋亡,提示多西他赛对于含有H1047R突变的TNBC作用效果更佳显著,能收获更好的疗效;3.多西他赛能显著抑制含有H1047R突变的MDA-MB-231细胞的Akt和mTOR的磷酸化,提示多西他赛可能通过作用于PI3K/Akt/mTOR信号通路来抑制TNBC细胞的增殖并影响细胞周期。
【图文】：

图２酶切结果电泳图逡逑１：邋１０ｋｂＭａｒｋｅｒ（条带自上而下依次为：１０ｋｂ、８ｋｂ、６ｋｂ、５ｋｂ、４ｋｂ、３．５ｋｂ、３ｋｂ、２．５ｋｂ、２ｋｂ、逡逑

放置于４°Ｃ冰箱中保存。逡逑－ＭＢ－２３１用完全培养基，在３７°Ｃ、生长状态，２？３ｄ换液，当细胞生长传代，，２？３ｄ传代１次。逡逑建逡逑－３ＦＬＡＧ－ＣＭＶ－ＥＧＦＰ逡逑ｅｌ逡逑
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.9

【参考文献】

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本文编号：2606588