MicroRNA-638表达对人骨肉瘤细胞增殖的影响

发布时间：2017-03-25 03:15

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【摘要】：【背景】在儿童和青少年人群中最常见的恶性骨肿瘤是骨肉瘤,骨肉瘤具有增殖速度快,易耐药的特点,使得骨肉瘤在临床上的死亡率和致残率都很高。微小RNA(microRNA,miRNA)是肿瘤分子生物学研究领域的热点,在肿瘤的发生发展过程中有着举足轻重的作用。现研究发现血清/血浆中存在上百种miRNA,这些miRNA与一些肿瘤疾病特异性存在一定联系,因此在肿瘤的诊断、治疗及预后监测方面有一定的应用价值。近期研究表明,miRNA在肿瘤的发生、发展和转移过程中起重要作用。本实验以miRNA-638为研究对象,观察其在骨肉瘤组织中的表达及对骨肉瘤细胞系MG63及U2OS增殖的影响。【目的】通过观察miRNA-638(MicroRNA-638)对人骨肉瘤(Osteosarcoma,OS)细胞增殖带来的变化,探讨miRNA-638在骨肉瘤细胞增殖行为中的作用。【方法】(1)用64对骨肉瘤组织和癌旁组织,以及骨肉瘤MG63、U2OS、HOS、SaOS2细胞株中和正常人成骨NHOst细胞株作为研究对象,通过实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测miRNA-638在上述组织和细胞中的表达。(2)使用LipofectamineTM2000转染miRNA-638 mimic或inhibitor,达到上调或下调mg63及u2os细胞内mirna-638的效果。(3)使用cck-8分别检测转染24h、48h、72h、96h后的吸光光度值。(4)使用平板克隆形成实验检测培养2周后在倒置显微镜计数超过30个细胞的菌落。【结果】(1)mirna-638在人骨肉瘤组织、癌旁组织、多种骨肉瘤细胞株中及正常人成骨细胞株中的表达:用实时定量聚合酶链反应的方法检查出64组骨肉瘤组织中成熟的mirna-638的表达水平。结果显示与配对的癌旁组织相比有36组(56.25%)骨肉瘤组织中mirna-638的表达是下调的(p0.001)。实时荧光定量聚合酶链反应技术分别检测骨肉瘤mg63、u2os、hos、saos2细胞株和nhost细胞株中的mirna-638的表达水平,结果提示在骨肉瘤细胞株中mir-638的表达明显下调(p0.05)。(2)cck-8与平板克隆形成实验:cck-8实验显示了mirna-638能抑制骨肉瘤mg63和u2os细胞的增殖(p0.05),相反,抑制mirna-638表达显著促进了mg63和u2os细胞的生长(p0.05)。平板克隆形成实验也证实了mirna-638的高表达能显著降低mg63和u2os细胞的生长率(p0.05)。【结论】(1)mirna-638在人骨肉瘤组织及骨肉瘤mg63、u2os、hos、saos2细胞株中的表达下调。(2)miRNA-638高表达能抑制人骨肉瘤细胞的增殖
【关键词】：人骨肉瘤 MG63 U2OS MicroRNA-638 细胞增殖
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R738.1
【目录】：

• 摘要4-7
• Abstract7-10
• 主要中英文缩略语索引10-12
• 第1章 绪论12-16
• 第2章 实验材料16-18
• 2.1 组织与细胞16
• 2.2 主要试剂16-17
• 2.3 主要实验仪器17-18
• 第3章 实验方法18-24
• 3.1 实验分组18
• 3.2 骨肉瘤细胞的培养18-19
• 3.3 qRT-PCR检测骨肉瘤、癌旁组织及细胞中miRNA638的表达19-20
• 3.4 CCK-8 及平板克隆形成实验20-22
• 3.5 数据处理及统计学分析22-24
• 第4章 实验结果24-30
• 4.1 qRT-PCR实验检测骨肉瘤组织、癌旁组织、骨肉瘤细胞及正常人骨细胞中成熟的 miRNA-638的表达水平24-25
• 4.2 CCK-8实验检测miRNA-638的高表达或低表达对骨肉瘤MG63及 U2OS 细胞的增殖能力的影响25-27
• 4.3 平板克隆实验检测高表达miRNA-638对骨肉瘤MG63及U2OS 细胞的集落形成能力的影响27-30
• 第5章 讨论30-36
• 第6章 结论36-38
• 参考文献38-46
• 综述46-54
• 参考文献50-54
• 作者攻读学位期间的科研成果54-56
• 致谢56

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本文编号：266581