WIF1甲基化与软骨肉瘤临床预后相关性研究
发布时间：2020-08-18 07:59
【摘要】：背景软骨肉瘤是由软骨细胞异常增生形成的异质性肿瘤,美国每年约有600人发病。发病率在骨肿瘤中仅次于骨肉瘤,以临床普遍放化疗耐药闻名。手术切除作为软骨肉瘤治疗中的主要手段,晚期肿瘤转移及侵袭则往往导致此类肿瘤患者的不良预后。新型药物研发或为软骨肉瘤患者的治疗提供新的策略。DNA甲基化作为三大表观遗传学机制之一,参与调控诸多肿瘤相关基因(如抑癌基因WIF1),并已在多种癌症中证实。然而,甲基化对WIF1的修饰改变在软骨肉瘤中却仍未报道。方法1.流行病学方法为回顾性实验分析,纳入美国麻省总医院(Massachusetts General Hosptial,MGH)癌症登记管理中心和骨肿瘤数据库45例软骨肉瘤标本。软骨肉瘤临床标本组织学分类及分型均由MGH病理科医生负责,临床数据按年龄、性别、组织学类型、肿瘤分级、肿瘤部位、转移情况、复发情况、疾病状态和死亡时间分类。2.采用实时定量PCR(qPCR)技术测定WIF1的DNA甲基化水平。3.采用Western-blot测定WIF1以及下游Wnt通路(Wnt5a/b、LRP6和Dvl2)蛋白表达水平。4.运用Kaplan-Meier生存曲线、log-rank分析及Cox多元回归分析研究WIF1甲基化与软骨肉瘤预后相关性。结果1.软骨肉瘤细胞系CS-1与SW1353中WIF1甲基化水平分别为97.33%与96.22%。2.通过Western-blot测定,证实了WIF1低蛋白表达以及其下游Wnt通路蛋白(Wnt5a/b、LRP6和Dvl2)的相对表达激活状态。3.共入45例软骨肉瘤患者,最终通过qPCR CT值质量控制43例,甲基化水平分部如下:平均数为46.61;中位数60.13;标准差(SD)39.92;范围0.00-99.54。4.随访资料示:17例(40%)死于疾病且中位随访时间为25个月;整体随访时间平均为57.63月,区间范围1至234个月。Kaplan-Meier生存曲线及log-rank分析均显示WIF1高甲基化水平与软骨肉瘤低生存预后(总生存期与无进展生存期)相关(p＜0.05)。Cox多元回归分析再次印证了测定WIF1基因甲基化水平可独立作为评估OS与PFS的预后指标(p＜0.05)。结论1.在软骨肉瘤细胞系中,WIF1基因启动子区的异常甲基化修饰可下调WIF1蛋白表达并且导致下游Wnt信号通路的异常激活传导。2.临床标本研究中,WIF1高甲基化水平与软骨肉瘤患者的较短无进展生存期以及总生存期相关。WIF1启动子甲基化水平可作为软骨肉瘤患者的独立预后预测因素。3.进一步的机制学研究或可为靶向Wnt信号传导通路提供新型的软骨肉瘤治疗策略。
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R738.1
【图文】：
结 果1 软骨肉瘤细胞系中 WIF1 启动子甲基化分析本研究检测了软骨肉瘤细胞系 CS-1 与 SW1353 中 WIF1 启动子甲基化水平（图 1A）。我们之所以选择 WIF1 基因作为研究对象主要因为其在多种恶性肿瘤中参与肿瘤发生发展的确定性，然而，WIF1 基因甲基化并未在软骨肉瘤中报道（补充表 1）。代表性的细胞系 WIF1 扩增曲线示于图 1B。我们发现 CS-1 中 WIF启动子甲基化水平为 97.33%而 SW1353 中为 96.22%（图 1C）。22 肿瘤相关基因甲基化水平于 CS-1 中分布为 0.51%至 98.81%；SW1353 中分布为 0.05%-99.61%
DNA 总量（背景信号）。X 轴为实时定量 PCR 循环数，Y 轴为荧光信号强度。（C系中的 WIF1 甲基化水平。WIF1 基因在 CS 细胞中发生高频率甲基化修饰：CS-1 中3%；UM，2.67%）；SW1353 中（M，96.22%；UM，3.78%）。M 表示甲基化，U甲基化。NA 甲基化沉默 WIF1 表达并加强 Wnt 信号传导通路由于证实 WIF1 在软骨肉瘤中的发生启动子甲基化修饰，蛋白印记实验步探究 WIF1 的蛋白表达水平。正如我们所期望的，WIF1 在未加入抗物前，在 CS-1 与 SW1353 细胞系中均呈现低水平表达甚至缺失表达（图度加入甲基化抑制药物 5-Aza-dC 进行去甲基进程后，WIF1 的蛋白表了梯度性的回升（图 2）。蛋白印记实验的定量分析显示 5-Aza-dC 可F1 蛋白水平表达，并呈现剂量依赖型相关性。另外，我们进一步发现 控 Wnt 信号通路在软骨肉瘤细胞系中的传导。结果显示当 WIF1 去甲后，导致下游 Wnt5a/b、LRP6 以及 Dvl2 在软骨肉瘤细胞系中的递减蛋平（图 2）。综上所述，以上结果表明 WIF1 的 DNA 甲基化修饰可激活在软骨肉瘤细胞中的传导。
13图 3 WIF1 在 CS 组织标本中的甲基化水平(A)各个标本中 WIF1 甲基化水平展示。（B）43 例 CS 肿瘤标本分布展示。4 WIF1 甲基化与软骨肉瘤患者预后分析我们接下来分析了 WIF1 甲基化与患者预后相关性。43 例软骨肉瘤中，1例（40%）死于疾病且中位随访时间为 25 个月；整体随访时间平均为 57.63 月
本文编号：2795955
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R738.1
【图文】：
结 果1 软骨肉瘤细胞系中 WIF1 启动子甲基化分析本研究检测了软骨肉瘤细胞系 CS-1 与 SW1353 中 WIF1 启动子甲基化水平（图 1A）。我们之所以选择 WIF1 基因作为研究对象主要因为其在多种恶性肿瘤中参与肿瘤发生发展的确定性，然而，WIF1 基因甲基化并未在软骨肉瘤中报道（补充表 1）。代表性的细胞系 WIF1 扩增曲线示于图 1B。我们发现 CS-1 中 WIF启动子甲基化水平为 97.33%而 SW1353 中为 96.22%（图 1C）。22 肿瘤相关基因甲基化水平于 CS-1 中分布为 0.51%至 98.81%；SW1353 中分布为 0.05%-99.61%
DNA 总量（背景信号）。X 轴为实时定量 PCR 循环数，Y 轴为荧光信号强度。（C系中的 WIF1 甲基化水平。WIF1 基因在 CS 细胞中发生高频率甲基化修饰：CS-1 中3%；UM，2.67%）；SW1353 中（M，96.22%；UM，3.78%）。M 表示甲基化，U甲基化。NA 甲基化沉默 WIF1 表达并加强 Wnt 信号传导通路由于证实 WIF1 在软骨肉瘤中的发生启动子甲基化修饰，蛋白印记实验步探究 WIF1 的蛋白表达水平。正如我们所期望的，WIF1 在未加入抗物前，在 CS-1 与 SW1353 细胞系中均呈现低水平表达甚至缺失表达（图度加入甲基化抑制药物 5-Aza-dC 进行去甲基进程后，WIF1 的蛋白表了梯度性的回升（图 2）。蛋白印记实验的定量分析显示 5-Aza-dC 可F1 蛋白水平表达，并呈现剂量依赖型相关性。另外，我们进一步发现 控 Wnt 信号通路在软骨肉瘤细胞系中的传导。结果显示当 WIF1 去甲后，导致下游 Wnt5a/b、LRP6 以及 Dvl2 在软骨肉瘤细胞系中的递减蛋平（图 2）。综上所述，以上结果表明 WIF1 的 DNA 甲基化修饰可激活在软骨肉瘤细胞中的传导。
13图 3 WIF1 在 CS 组织标本中的甲基化水平(A)各个标本中 WIF1 甲基化水平展示。（B）43 例 CS 肿瘤标本分布展示。4 WIF1 甲基化与软骨肉瘤患者预后分析我们接下来分析了 WIF1 甲基化与患者预后相关性。43 例软骨肉瘤中，1例（40%）死于疾病且中位随访时间为 25 个月；整体随访时间平均为 57.63 月
【参考文献】
相关期刊论文 前1条
1 魏慧君;房念珍;郭丽丽;吴志浩;周清华;;RASSF1A基因启动子甲基化与非小细胞肺癌关系的meta分析[J];中国肺癌杂志;2015年07期
本文编号：2795955
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/waikelunwen/2795955.html
最近更新
教材专著
