PPARδ激动剂对人关节液来源的间充质干细胞成软骨分化及抗炎效果的影响

发布时间：2020-10-27 14:25

　　 【目的】证明过氧化物酶体增殖物激活受体PPARδ激动剂(GW0742)能够促进人关节液来源的间充质干细胞(human synovial fluid-derived mesenchymal stem cells,hSF-MSCs)成软骨分化,并且能够联合hSF-MSCs更有效地抑制炎性环境中炎症因子的表达。【方法】用5ml注射器从膝骨关节炎患者患侧关节腔内抽取关节积液进行分离培养,并进行鉴定。设置空白对照组、TGF-β1组、TGF-β1+GW0742组及GW0742组,采用Pellet法拟3D环境诱导hSF-MSCs成软骨分化。通过比较各组细胞增殖速率、成软骨分化相关标志物SOX9基因表达和蛋白合成量以及阿利新蓝、甲苯胺蓝染色等指标来评估GW0742对hSF-MSCs增殖及成软骨分化能力的影响。另设置空白对照组、hSF-MSCs组、hSF-MSCs+GW0742组,通过比较第1、3天各组培养液中炎症因子TNF-α、IL-1β的表达来评估GW0742+hSF-MSCs组的抗炎效果。【结果】通过直接贴壁法,成功从炎性关节液中分离培养hSF-MSCs,并鉴定属于MSCs;就增殖能力而言,TGF-β1组、TGF-β1+GW0742组及GW0742组对hSF-MSCs无明显影响;从PCR和Western Blot对SOX9检测结果表明,GW0742组的hSF-MSCs成软骨分化作用最为明显;通过阿利新蓝和甲苯胺蓝染色结果可以观察到,GW0742组能够分泌较多的蛋白聚糖,且比TGF-β1+GW0742组染色更为致密;在抗炎效果方面,hSF-MSCs+GW0742组炎症因子的含量明显低于单纯hSF-MSCs组。【结论】PPARδ激动剂GW0742可能具备提升hSF-MSCs成软骨分化的能力,并且联合hSF-MSCs可能会增强在炎性环境中的抗炎效果。这为PPARδ激动剂联合间充质干细胞治疗骨关节炎奠定了一定的理论基础。
【学位单位】：广州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R68
【部分图文】：

结 果RESULTS1 细胞学观察及鉴定1.1 hSF-MSCs 的细胞学观察hSF-MSCs 接种 4h 后，可在显微镜下观察到散在小圆点样细胞贴壁，1d 后部分小圆点样细胞变为长梭形细胞，其长轴径较正常 MSCs 长，细胞透亮度难分辨细胞内结构（如图 1A、1B）。随着细胞数量增加，细胞长轴径逐渐，细胞透亮度逐渐升高，并且出现集簇放射状单克隆细胞团落（如图 1C）续传代扩增培养后，第 3 代 hSF-MSCs 细胞形态以呈长梭形状贴壁布满整个（如图 1D）。

图 2 流式细胞技术检测细胞表面抗原 CD105、CD73、CD29 呈阳性表达，CD45、CDHLA-DR 呈阴性表达3.1.3 成骨、成脂、成软骨分化(1) 加入成骨诱导分化培养基后，细胞质中逐渐出现高密度不透光物质，随着间加长，矿化物质逐渐增多，且面积增大，约 21 天后行茜素红染色，可细胞质中有棕黄色或橙红色物质沉积，如图 3A 所示。(2) 加入成脂诱导分化培养基后，细胞形态逐渐由长梭形变为椭圆形，14 天后现细胞直径缩小，形态逐渐变为圆形或不规则形，排列较为杂乱，约 21行油红 O 染色呈阳性，如图 3B 所示。(3) 采用 Pellet 法加入成软骨诱导分化培养基后，沉于离心管底部的细胞团断回缩，逐渐形成球状细胞团，换液时轻弹离心管底部可见细胞球能够从部漂起并缓慢再次沉于底部。诱导后 14 天，换液时轻触细胞球，可见细

26图 3 hSF-MSCs 三系分化及其染色（A 为成骨分化茜素红染色，B 为油红 O 染色，C 为法成软骨分化，D 为成软骨分化软骨球，E 为成软骨分化 HE 染色，F 为成软骨分化阿蓝染色）3.1.4 hSF-MSCs 生长曲线绘制及增殖能力评估
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本文编号：2858641