靶向治疗泛连接蛋白3对骨性关节炎疗效的细胞实验研究

发布时间：2020-11-02 01:45

　　 目的通过体外细胞模型实验,研究抑制Pannexin3是否能够治疗骨性关节炎。方法收集因骨性关节炎行全膝关节置换术患者的关节软骨组织,建立细胞模型。实验组用siRNA+脂质体转染细胞,对照组用NC+脂质体转染细胞。通过RT-PCR及Western-blot检测细胞内MMP-1及MMP-13的mRNA水平及其蛋白表达情况。最后数据用独立样本T检验处理。结果软骨细胞培养约14天(第一代)及8天(第二代)可长满瓶底80%～90%,前2代较少出现分化,可被Ⅱ型胶原蛋白免疫化学法将其染成棕黄色,在转染24小时后约80%细胞内可见荧光表达。实验组细胞中MMP-1及MMP-13的mRNA含量及蛋白水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P0. 05)。结论抑制Pannexin3基因可抑制骨性关节炎软骨细胞中MMP-1、MMP-13mRNA及其蛋白表达。Pannexin3可能是骨性关节炎潜在治疗靶点。
【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 研究材料:
    1.2 方法
        1.2.1 软骨细胞分离、培养及传代:
        1.2.2 软骨细胞的鉴定:
        1.2.3骨性关节炎软骨细胞转染:
        1.4.4泛连接蛋白3、基质金属蛋白酶1、13mRNA检测:
        1.3.5 基质金属蛋白酶1、13蛋白的检测:
    1.4 统计学方法:
2 结果
    2.1 软骨细胞的培养:
    2.2 软骨细胞的鉴定:
    2.3 软骨细胞转染:
    2.4 选择si RNA序列:
    2.5 RT-PCR检测转染后Panx3、MMP-1、MMP-13m RNA表达情况:
    2.6 Western-blot对转染后MMP-1、MMP-13蛋白水平检测:
3 讨论

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本文编号：2866394