人脐带间充质干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的时间窗及iNOS表达研究

发布时间：2020-11-21 10:51

　　 研究背景和目的:脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)是由外伤、感染、缺血或相关病变累及引起的中枢神经系统疾病,致残率和致死率极高,给家庭和社会造成沉重负担。如何使受损的神经结构进行再生和修复,从而促进神经功能障碍尤其是运动功能障碍的恢复仍是当前治疗的难点和研究的热点。已有研究表明人脐带间充质干细胞(Human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)移植可治疗SCI,但少有对其最佳移植时机和机制进行探索。本研究的目的是明确hUC-MSCs治疗SCI的最佳时间窗以及诱导型一氧化氮合酶(induced nitric oxide synthase,iNOS)表达的变化,为临床应用提供参考。方法:购入并通过贴壁法培育hUC-MSCs,采用改良Allen’s法制作大鼠SCI模型。将45只SD大鼠随机分3大组:假手术组、模型组和hUC-MSCs组,每组15只。假手术组只暴露T8~T10节段椎板,模型组在暴露后予以打击;hUC-MSCs组按SCI后细胞移植时间分为0 h组、8 h组、48 h组、1 w组和2 w组,每组3只,分别在SCI后经尾静脉注入1×10~6/ml×1ml hUC-MSCs。在干预后第3 d、7 d、14 d、21 d和28 d使用大鼠后肢运动功能评分(Basso,Beattie and Bresnahan locomotor rating score,BBB)量表评估各组大鼠后肢运动功能得分,评分完成后用心脏灌注法取脊髓标本并采取印迹法测量iNOS表达水平。使用SPSS软件中的t检验探寻hUC-MSCs治疗大鼠SCI的有效性,通过比较移植组内各时间窗植入hUC-MSCs后大鼠运动功能得分的差异找出最佳移植时机和iNOS变化规律。结果:随着时间推移,假手术组BBB评分无明显变化,模型组和hUC-MSCs组BBB评分逐渐提高,尤其在损伤后1 w和2 w之间上升最显著。与假手术组比较,模型组和hUC-MSCs组BBB得分下降且iNOS表达量增多;hUC-MSCs组与模型组比较,BBB得分提高更明显(p0.05)且iNOS表达量更少。hUC-MSCs组内,48 h组和1w组与其他组比较,BBB评分提高更明显且iNOS表达水平更低。讨论:本研究结果表明hUC-MSCs移植治疗大鼠SCI是相对安全而有效的,在SCI后48 h或1 w后进行移植可能效果更佳,需要进一步的大样本随机对照研究。
【学位单位】：广东药科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R651.2
【部分图文】：

广东药科大学硕士研究生学位论文 从以上表格可看出， hUC-MSCs 移植组和模型组大鼠的 BBB 评分在第 3 d和第 7 d 无明显统计学差异（p＞0.05），而在 14 d、21 d 及 28d 均存在较大统计学差异，提示在 SCI 后第 7d 和 14d 之间大鼠 BBB 功能出现较显著的改变，参考相应数值，从统计学意义上来说，hUC-MSCs 移植组大鼠的运动功能较模型组有所提高。2、为了解假手术组、hUC-MSCs 移植组和模型组之间大鼠 BBB 评分随时间变化的规律，采用折线图（图 2-1）：图 2-1 各组大鼠 BBB 评分随时间变化图

2 1 图 2-2 说明在移植组当中，1 w 和 48 h 植入 hUC-MSCs 的大鼠 BBB 得分比其他时间窗植入 hUC-MSCs 的大鼠得分更高，说明 1 w 和 48 h 可能是 SCI 大鼠进行hUC-MSCs 移植治疗的最佳时间窗。2.3.5 讨论 使用 BBB 功能量表对大鼠进行后肢运动功能评分是目前受到较广泛应用的大鼠运动功能评定的方法之一，另外斜板实验可与之互补，斜板实验一般在 BBB评分后 30 min 进行，检测大鼠抓握、维持姿势的能力，做法为：将大鼠身体轴线与有纹理橡胶覆盖的斜板纵轴垂直放置，从 0°开始，斜板每次升高 5°，以大鼠停留 5 s 不滑下的最大角度为其功能值，本实验中未进行。在本次实验中，在植入 hUC-MSCs 的第 3 d 和第 7 d，移植组大鼠和模型组大鼠 BBB 功能评分尚未见明显统计学差异，在 14 d 才看出两者 BBB 得分的明显不同，进而推断出本次实验中 hUC-MSCs 干预的起效时间可能在第 7d 与第 14d 之
【参考文献】

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本文编号：2892900