低氧微环境诱导下脂肪间充质干细胞外泌体促进人脂肪组织移植成活及再血管化的研究

发布时间：2020-12-03 04:55

　　研究背景与目的:自体脂肪移植是整形外科中最重要的修复重建技术手段之一,广泛应用于各种先天疾病及后天创伤所致的颜面畸形、乳腺癌术后的乳房重建和隆乳、以及年轻化手术等。然而其术后的移植物再吸收以及脂肪体积存留的不可预知性一直是阻止此项技术发展的瓶颈。移植组织存活的机制研究表明,早期血运的建立对脂肪颗粒的成活起到关键的作用。近十年兴起的干细胞技术为此提供了新思路,并已有外科医生应用富含干细胞的基质血管成分（stromal vascular fraction,SVF）进行临床实践,取得了良好的效果,但是背后机制不明确,干细胞在此过程中起到何种作用也未知。外泌体（exosomes）是近年干细胞研究的新热点,它是一种细胞分泌的纳米级别的生物囊泡,充当了细胞间“通讯”载体的功能。既往研究结果显示,外泌体参与机体多种病理生理过程,并且在组织器官损伤的修复以及促进血管生成方面都有效果。是干细胞强大旁分泌功能的承担者之一。因此,本课题旨在研究干细胞外泌体是否可以通过刺激移植物的血管生成促进游离移植脂肪组织存活,为临床提高自体脂肪填充手术的成功率提供一个新思路。方法:1.外泌体的纯化及鉴定。（1）培养人原代... 

【文章来源】：中国人民解放军医学院北京市

【文章页数】：95 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１－２?ｈＡＤＳＣｓ具有向成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞多项分化的潜能（标尺：５〇ｕｍ）??

一周后细胞质中出现小点状物质，随着诱导时间延长，小点逐渐增大成为小泡，??此时脂滴形成。３周后，小泡间相互融合，细胞内脂滴增大、增多。油红０染色显示??出特定的橙红色（图１－２Ｆ）。??３．成软骨诱导及鉴定??Ｐ３代ｈＡＤＳＣｓ成软骨诱导６周后，细胞球被福尔马林固定，经包埋、切片、脱蜡，??阿尔新蓝染色后，光镜下观察可见切片细胞外基质呈包膜样排列，阿尔新蓝色染色阳??性（图?１－２Ｈ）。??圓??图１－２?ｈＡＤＳＣｓ具有向成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞多项分化的潜能（标尺：５〇ｕｍ）??三、ｈＡＤＳＣｓ表面标志物分析??流式细胞术检测Ｐ３代ｈＡＤＳＣｓ细胞表面特异性蛋白标志物。间质细胞表面标志物??阳性：ＣＤ９０?（?＋?）、ＣＤ１０５?（?＋?）、ＣＤ７３?（＋）、ＣＤ１６６?（?＋?）、ＣＤ２９?（?＋?）；无造血系??细胞标志物表达：ＣＤ３４?（＿）、ＣＤ４５?（－），无巨噬细胞标记物表达：ＣＤ１４?（－），无??内皮细胞标记物表达：ＣＤ３１?（－），无ＨＬＡ－ＤＲ表达（图１－３）。??２６??

?＾＇Ｔｔ０ｉａｆｉ?Ｖ?ＦｆＴＣ?－Ａ?ｆ?ｔＴ＊ｌ?－Ａ??图１－４?５％低氧条件下不同时间点ｈＡＤＳＣｓ凋亡率??五、人脂肪间充质干细胞来源外泌体ｈＡＤＳＣ－Ｅｘｏ形态学检测??１．?ｈＡＤＳＣ－Ｅｘｏ电子显微镜下形态??透射电子显微镜观察下，外泌体呈现中央凹陷的茶杯样（ｃｕｐ－ｓｈａｐｅｄ）及球形小囊??泡状两种典型的形态，直径在ｌＯＯｎｍ左右（图１－５－１）。??ｒ?：?ｖ”，：，??泛Ｉ?．－戒：免?＇＜‘害＼??图１－５－１透射电镜下ｈＡＤＳＣ－Ｅｘｏ形态（标尺：２００ｎｍ）??２．?ｈＡＤＳＣ－Ｅｘｏ的粒子直径分布??外泌体重悬液稀释到ｌｍｌ后，上ＮａｎｏＳｉｇｈｔ纳米粒子追踪仪检测，可实施观测到放??２８??


本文编号：2896026