MicroRNA-208b通过负调控ROR2抑制人骨肉细胞增殖、迁移及侵袭的研究

发布时间：2020-12-08 19:40

　　目的骨肉瘤是一种好发于儿童和青少年,恶性程度甚高的原发性骨肿瘤。该肿瘤易在早期出现远处肺转移,病死率较高,预后极差。探索骨肉瘤的具体发病机制以及新的诊治策略是改善其预后的重要途径。MicroRNAs（miRNAs）是一类真核生物内源性非编码微小RNA,与靶基因mRNA的3’非编码区（3’ UTR）的“种子序列”配对结合,从而降解靶基因mRNA或抑制其翻译。已有文献报道,miRNAs表达失调在骨肉瘤的发生、发展、侵袭和转移等过程中具有重要作用,本研究旨在探讨miR-208b在骨肉瘤组织和细胞系中的表达及其对骨肉瘤细胞系增殖、侵袭和转移能力的影响。方法首先利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）的方法分别检测miR-208b在骨肉瘤组织、正常骨组织、人正常成骨细胞系NHOst和2种骨肉瘤细胞系（U20S和Saos-2）中的差异性表达情况,随后建立稳定表达miR-208b的骨肉瘤细胞系U2OS和Saos-2;分别通过CCK8实验和克隆形成实验检测骨肉瘤细胞的增殖能力;流式细胞术检测骨肉瘤细胞周期;裸鼠皮下成瘤实验在体内观察骨肉瘤细胞形成移植瘤生长能力;划痕愈合和Transwell侵袭实验检测... 

【文章来源】：延边大学吉林省 211工程院校

【文章页数】：115 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图２．?２首閃熘ＵＺＵＳ、Ｓａｏｓ－２细胞甲］ａ：表：达ｍｉＫ－２Ｕ８ｂ的双果检测??

Ｓａｏｓ－２细胞的增殖能力的影响。在细胞克隆形成实验中，转染ｍｉＲ－２０８ｂ??ｍｉｍｉｃｓ或ｍｉｍｉｃｓ?ｃｏｎｔｒｏｌ后２４?ｈ进行细胞计数并将细胞接种于１２孔??板中，以＞５０个细胞的细胞集落为克隆形成的标准。如图２．４所示，在??骨肉瘤Ｕ２０Ｓ细胞中，ｍｉＲ－２０８ｂ?ｍｉｍｉｃｓ组和ｍｉｍｉｃｓ?ｃｏｎｔｒｏｌ组细胞克??隆数分别为２６±３．０，５８土４．０，升高ｍｉＲ－２０８ｂ的表达可显著抑制Ｕ２０Ｓ??细胞的克隆形成能力，两组间差异具有统计学意义（Ｋ０．?０５）。在骨肉瘤??Ｓａｏｓ－２细胞中，ｍｉＲ－２０８ｂ?ｍｉｍｉｃｓ组和ｍｉｍｉｃｓ?ｃｏｎｔｒｏｌ组细胞克隆数分??别为２７±３．０，５６±５．０，升高ｍｉＲ－２０８ｂ的表达可显著抑制Ｓａｏｓ－２细胞??的克隆形成能力，两组间差异具有统计学意义（Ｋ０．０５）。这些实验结果??表明，过表达ｍｉＲ－２０８ｂ可抑制骨肉瘤细胞的克隆形成能力。??ｍｉｍｉｃｓ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｍｉＲ－２（）８ｂ?ｍｉｍｉｃｓ??－??－??ｍｉｍｉｃｓ?ｃｏｎｔｒｏｌ??８０?－ｉ?Ｅｓａ?ｍｉＲ－２０８ｂ?ｍｉｍｉｃｓ??

±１．８８）?％，差异具有统计学意义（均户〈０．０５）。同样在骨肉瘤Ｓａｏｓ－２??细胞中有一致的实验结果。??如图２．６所示，在骨肉瘤Ｕ２０Ｓ细胞中，与对照组相比，过表达??ｍｉＲ－２０８ｂ后Ｃｙｃｌｉｎ?Ｅ和Ｃｙｃｌｉｎ?Ｄ１的相对表达量均明显减少??（０．２８±０．０４，０．４２土０．０５），差异具有统计学意义（均Ｋ０．?０１）。同样??在骨肉瘤Ｓａｏｓ－２细胞中，过表达ｍｉＲ－２０８ｂ后Ｃｙｃｌｉｎ?Ｅ和Ｃｙｃｌｉｎ?Ｄ１??的相对表达量均明显减少（０．?３１±０．０３，?０．?３９±０．０４），差异具有统计学??意义（均Ｋ０．?０１）而两种细胞中ＣＤＫ４的表达量均无明显变化（均乃０．?０５）。??２３??

【参考文献】：
期刊论文
[1]Exploration of the regulatory effect of miR-21 on breast cancer cell line proliferation and invasion as well as the downstream target genes[J]. Ying Kuang,Ying-Jie Nie.  Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 2016(05)
[2]miR-181b通过靶向调控N-myc下游调节基因2影响骨肉瘤细胞的迁移和侵袭[J]. 邵建立,李志忠,王亮,焦根龙,周志刚,孙国栋.  南方医科大学学报. 2016(03)



本文编号：2905582