胆汁内外引流术对梗阻性黄疸大鼠肠黏膜MUC2蛋白表达的影响

发布时间：2017-04-08 06:19

  本文关键词：胆汁内外引流术对梗阻性黄疸大鼠肠黏膜MUC2蛋白表达的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：近年来,大量科学研究证实肠黏膜屏障损伤是导致梗阻性黄疸(obstructive jaundice,OJ)菌血症及内毒素血症的重要原因,并会引发全身炎症反应及多器官功能障碍危及生命。肠道黏液层(mucus layer)是宿主肠黏膜第一道天然防御屏障,它主要由肠道杯状细胞合成和分泌的黏蛋白-2(mucin 2,MUC2)组成,MUC2蛋白通过其N-端和C-端蛋白结构域形成巨大网状聚合物,构成肠道黏液层骨架,在肠道黏液屏障中起到了至关重要的保护作用。正常肠道黏液层中,MUC2蛋白能够润滑肠道,避免肠道有害物质与肠上皮细胞直接接触,同时还能发挥免疫屏障功能,抵御肠腔病原体的侵害。多项研究证实肠黏膜屏障损伤时,肠道黏液层变薄、破损,MUC2蛋白表达改变,导致肠上皮细胞被细菌侵袭,肠黏膜稳态失衡,炎症反应加重,所以积极开展对OJ时肠道黏液层及MUC2蛋白的实验性研究,具有重大临床指导意义。OJ是一类由于肝外或肝内胆管梗阻,引起胆红素升高,并出现组织及体液黄染等一系列临床表现的疾病,目前临床上引起胆道梗阻疾病很多,但主要分为两大类,一类是良性病变,包括胆总管或肝总管结石、胆管良性狭窄、胆肠吻合口狭窄;另一类是恶性疾病,包括肝门部胆管癌、壶腹周围癌、胰头癌;对于恶性OJ病人,外科手术仍然是主要的治疗方法,但对于外科手术前是否需要解除梗阻,目前仍有争议,一方认为术前解除梗阻能有效降低术后发病率和死亡率;另一方认为解除梗阻的操作本身会引起并发症,最终导致弊大于利;而且对于解除胆道梗阻的方式,是采用胆汁内引流术,还是胆汁外引流术,迄今仍有争议;多数学者认为内引流术更符合人体正常生理解剖,并恢复胆汁酸肠肝循环,能提供重要抑菌功能,改善肠黏膜屏障损伤和降低内毒素相关并发症。因此本实验将进一步探讨胆汁内、外引流术对OJ大鼠肠黏膜MUC2蛋白表达的影响及意义。具体实验内容如下:目的:探讨胆汁内、外引流术对OJ大鼠肠黏膜MUC2蛋白表达的影响及意义。方法:雄性sprague-dawley大鼠36只,体重约200-250g,随机分成假手术组(shamoperation,sh),梗阻性黄疸组(obstructivejaundice,oj),胆汁内引流组(internaldrainage,id)和胆汁外引流组(externaldrainage,ed)组。1手术造模过程第一次手术:(1)sh组:开腹后只做十二指肠牵拉,不结扎胆管;(2)oj组:开腹后首先找到肝脏及十二指肠,在肝脏与十二指肠间找到胆总管(与肝门静脉伴行),双重结扎胆总管,中间离断;(3)id组:操作同oj组;(4)ed组:操作同oj组;7天后行第二次手术:(1)sh组:再次开腹后,只做十二指肠牵拉,不做其他处理;(2)oj组:开腹后可见膨大胆管,只做十二指肠牵拉,不做其他处理;(3)id组:开腹后可见膨大的胆管,引流管一端插入胆管,缝线固定,另一端与十二指肠相通,荷包缝合固定;(4)ed组:开腹后可见膨大的胆管,引流管一端插入胆管,缝线固定,另一端经皮下引致颈背部缝线固定;2标本留取:4组大鼠模型均于2次术后7天取材,留取下腔静脉血2ml用于检验内毒素及肝功能,取距回盲瓣约10cm的小肠数段,常规he染色观察肠黏膜病理形态学变化;电镜下观察肠黏膜超微结构及杯状细胞合成、分泌情况;阿尔辛蓝-过碘酸雪夫氏(alcianblue/perioodicacidschiff,ab/pas)染色观察阳性染色杯状细胞的分泌及黏液层厚度的改变情况;应用免疫组化染色法(immunohistochemistry,ihc)测定muc2蛋白的表达。结果:1动物一般状态大体观察:oj,id,ed组大鼠第一次手术行胆总管结扎后进食进水减少,耳部皮肤发黄,尿色变黄,运动减少;ed与id组大鼠第二次手术解除梗阻后进食进水增多,活动增加,尿色逐渐变清亮、透明;oj组2次手术后(只牵拉十二指肠),皮肤毛色及尿液较前无明显变化,进食进水及活动进一步减少,精神萎靡,体重减轻;sh组一般情况稳定,未见明显异常。2肝功能及内毒素:oj组(0.93±0.28eu/ml)大鼠血清内毒素水平明显高于sh组(0.15±0.10eu/ml)(p0.01);id组(0.21±0.12eu/ml)和ed组(0.44±0.20eu/ml)血清内毒素水平较oj组(0.93±0.28eu/ml)明显降低,差异具有统计学意义(p0.01),且id组较ed组血清内毒素水平降低更明显,两组差异有统计学意义(p0.05);oj组tbil(107.72±18.22μmol/l)、alt(122.82±36.23u/l)、ast(409.48±73.06u/l)较sh组(21.46±3.45μmol/l)、(40.79±9.24u/l)、(88.72±29.31u/l)均显著升高(p0.01);id组血清tbil(30.51±12.44μmol/l)、alt(56.79±19.66u/l)、ast(178.49±67.52u/l)和ed组血清tbil(35.89±15.57μmol/l)、alt(59.44±20.11u/l)、ast(109.09±38.06u/l)较oj组均明显降低(p0.01);id组与ed组大鼠血清tbil、alt值无显著性差异(p0.05),ed组血清ast较id组下降更明显(p0.05)。3he染色示:sh组肠黏膜黏膜上皮完整,黏膜腺体及绒毛排列整齐,黏膜、黏膜下层及肌层等各层次清晰,伴少许炎性细胞浸润;oj组大鼠肠黏膜完整性破坏,腺体排列紊乱,肠绒毛短缩,变钝,间隙增大,固有层大量炎性细胞浸润,oj组chiu肠黏膜损伤评分(3.93±1.10)较sh组(0.28±0.40)明显升高,差异有统计学意义(p0.01);oj组肠绒毛高度(175.14±65.38μm)较sh组(457.67±88.56μm)明显降低,差异有统计学意义(p0.01)。id组与ed组大鼠肠黏膜形态较oj组明显改善,id组与ed组chiu肠黏膜损伤评分均明显低于oj组(1.64±0.94),(2.81±0.75),(3.93±1.10)(p0.01),ed组chiu肠黏膜损伤评分高于id组(p0.05),id组和ed组肠绒毛高度(324.85±65.84μm),(291.63±66.36μm)相近(p=0.37),但两组均明显高于oj组(175.14±65.38μm),差异有统计学意义(p0.01)。4ab-pas染色示:sh组杯状细胞胞内充满紫红色物质,ab-pas染色的平均光密度值(od0.43±0.06),肠道黏液层形态完整,厚度(316.5±52.32μm);oj组大鼠肠杯状细胞胞内被染成紫红色物质减少,黏液层变薄,破损,甚至缺失,oj组ab-pas染色的平均光密度值(od0.16±0.05)低于sh组(od0.43±0.06),差异有统计学意义(p0.01);oj组黏液层厚度(77.14±38.66μm)明显低于SH组(316.50±52.32μm),差异有统计学意义(p0.01);ID组较OJ组大鼠AB-PAS染色的平均光密度值明显增多(OD0.35±0.05),(OD 0.16±0.05)(p0.01),ID组肠道黏液层厚度(257.47±80.57μm)较OJ组(77.14±38.66μm)明显增加(p0.01);ED组较OJ组AB-PAS染色的平均光密度值(OD 0.26±0.04),(OD 0.16±0.05)增高,两组比较差异有统计学意义(p0.05);ED组黏液层厚度(137.38±38.15μm)高于OJ组(77.14±38.66μm)(p0.05);ID组OD值高于ED组,差异有统计学意义(p0.05),ID组黏液层厚度高于ED组,差异有统计学意义(p0.01)。5电镜下可见:SH组肠黏膜微绒毛排列整齐,杯状细胞内黏液颗粒饱满。OJ组大鼠,肠黏膜微绒毛明显稀疏、部分断裂,排列紊乱,部分杯状细胞黏液颗粒稀少,出现空泡,ID组与ED组大鼠肠黏膜微绒毛整齐,可见杯状细胞充满粘液颗粒;胞内黏液颗粒较OJ组增多。6免疫组化示:SH组大鼠肠黏膜MUC2蛋白被染成棕褐色,主要表达于肠绒毛杯状细胞以及绒毛表面,SH组MUC2蛋白表达平均光密度值值(OD 0.46±0.03);OJ组肠绒毛被染成棕褐色杯状细胞稀少,肠绒毛表面棕褐色物质明显减少,MUC2蛋白表达平均光密度值(OD 0.16±0.02)较SH组(OD 0.46±0.03)明显减少,差异有统计学意义(p0.01);ID组(OD0.39±0.03)与ED组(OD 0.33±0.03)肠黏膜MUC2蛋白表达平均光密度值较OJ组明显增高,差异有统计学意义(p0.01),且ID组MUC2蛋白表达平均光密度值要高于ED组,两组比较差异有统计学意义(p0.05)。结论:OJ大鼠存在肠黏膜屏障损伤,肠道黏液层破损、变薄,缺失,MUC2蛋白表达降低,杯状细胞合成及分泌黏液减少,胆汁内、外引流术均能改善肠黏膜屏障损伤,促进MUC2蛋白表达,促进杯状细胞合成和分泌黏液增加,修复、更新黏液层,且内引流术优于外引流术。
【关键词】：梗阻性黄疸 胆总管结扎 胆汁内外引流术 肠黏膜屏障 黏蛋白-2 杯状细胞 黏液层
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R657.4
【目录】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-12
• 英文缩写12-13
• 前言13-15
• 材料与方法15-22
• 结果22-25
• 附图25-29
• 附表29-30
• 讨论30-32
• 小结32-33
• 参考文献33-37
• 综述 肠道黏液层与肠黏膜免疫37-47
• 参考文献42-47
• 致谢47-48
• 个人简历48

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 Jun Chen;Jia-Tian Dong;Xiao-Jing Li;Ye Gu;Zhi-Jian Cheng;Yuan-Kun Cai;;Glucagon-like peptide-2 protects impaired intestinal mucosal barriers in obstructive jaundice rats[J];World Journal of Gastroenterology;2015年02期

2 Zi-Kai Wang;Jian-Guo Xiao;Xue-Fei Huang;Yi-Chun Gong;Wen Li;;Effect of biliary drainage on inducible nitric oxide synthase, CD14 and TGR5 expression in obstructive jaundice rats[J];World Journal of Gastroenterology;2013年15期

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本文编号：292263