白藜芦醇通过经典Wnt/β-catenin信号通路调控髓核细胞细胞外基质表达
发布时间：2020-12-18 17:36
目的探讨白藜芦醇（resveratrol,RES）对退变髓核细胞细胞外基质（extracellularmatrix,ECM）表达的调控作用及其相关分子机制。方法选取临床上接受椎间盘摘除术的10例患者,其中5例为年轻脊柱爆裂骨折患者,作为对照组;余5例为老年腰椎间盘突出症患者,作为退变组。取两组患者髓核组织,免疫组织化学染色比较β-catenin的原位表达,Western blot检测β-catenin、II型胶原和聚集蛋白聚糖（Aggrecan）蛋白表达。取退变组髓核组织分离、培养髓核细胞（nucleusβulβosus,NP）,分别用IL-1β单独（B组）或联合RES（C组）刺激第3代细胞,并设未刺激细胞空白对照组（A组）,Western blot检测II型胶原和Aggrecan蛋白表达。进一步采用小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）靶向沉默SIR1江1和β-catenin后,采用Western blot、实时荧光定量PCR检测β-catenin、SIRT1蛋白和基因表达;用RES,IL-1ββ,SIRT1-siRNA分别或组合刺激NP细胞后分为空白...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：41 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１免疫组织化学染色检测两组髓核组织Ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ蛋白表达（ｘ２００）箭头示ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ表达阳??细ａ．组ｂ．组??
??Ａｇｇｒｅｃａｎ蛋白相对表达量显著下降，差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。见图２。??２．２?ＲＥＳ对酿核细胞ＥＣＭ表达的影响??＼＼＾８〖６１１＾１〇１：检测示，８组卩－＃Γ保叮保必?保钡鞍紫喽员泶锪肯灾?哂谌恕ⅲǎ拮椋?保毙停崳?胶原和Ａｇｇｒｅｃａｎ相对表达量显著低于Ａ、Ｃ组，差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；??Ａ、Ｃ组间比较各蛋白相对表达量未见明显差异（Ｐ＞０．０５）。见图３。??２．３?ｓｉＲＮＡ转染靶向沉默ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ和ＳＩＲＴ１表达??Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测及实时突光定量ＰＣＲ检测均显示，ｃ组Ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ、ＳＩＲＴ１蛋??白及基因相对表达量均显著低于ａ、ｂ组，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；?＝ａ、ｂ两??组Ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ和ＳＩＲＴ１蛋白相对表达量比较未见明显差异（Ｐ＞０．０５）见图４、５。??２．４?ＲＥＳ调控ＥＣＭ表达的信号通路检测??２．４．１细胞免疫焚光染色检测ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ核转位情况??荧光显微镜下可见对１组Ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ蛋白散在表达在胞浆内，胞质呈现绿色荧??光；而２组髓核细胞在ＩＬ－１Ｐ刺激下，ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ主要呈现细胞核内表达，细胞核表??达绿色荧光
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【参考文献】：
期刊论文
[1]经典Wnt信号通路对骨代谢的调节作用[J]. 徐伟丽,牛玲玲,王文侠,崔鹏举. 中国骨质疏松杂志. 2016(03)
[2]椎间盘退变与细胞死亡的相关研究进展[J]. 徐涛涛,廖菲,金红婷,童培建,肖鲁伟,吴承亮. 中国骨伤. 2015(07)
[3]Wnt信号通路与椎间盘的发展[J]. 梁广胜,殷明,刘玉亮,魏强强,周荣平,殷嫦嫦. 中国矫形外科杂志. 2014(05)
[4]白藜芦醇恢复去分化正常髓核细胞表型的实验研究[J]. 沈皆亮,胡侦明,钟小明,王大武,徐林飞. 中国修复重建外科杂志. 2013(05)
[5]白藜芦醇通过上调SIRT1促进退变髓核细胞胞外基质合成[J]. 沈皆亮,胡侦明,钟小明,张晓军,江维. 细胞与分子免疫学杂志. 2012(11)
[6]沉默信息调节因子2同源蛋白1通过Akt/PKB通路抑制人退变椎间盘髓核细胞凋亡[J]. 王大武,胡侦明,郝杰,何斌,甘强,钟小明,沈皆亮,方济. 生物化学与生物物理进展. 2012(06)
[7]TNF-α、IL-1β在退变椎间盘组织中的表达及其意义[J]. 张林华,卜海富. 临床骨科杂志. 2010(01)
本文编号：2924339
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：41 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１免疫组织化学染色检测两组髓核组织Ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ蛋白表达（ｘ２００）箭头示ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ表达阳??细ａ．组ｂ．组??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]经典Wnt信号通路对骨代谢的调节作用[J]. 徐伟丽,牛玲玲,王文侠,崔鹏举. 中国骨质疏松杂志. 2016(03)
[2]椎间盘退变与细胞死亡的相关研究进展[J]. 徐涛涛,廖菲,金红婷,童培建,肖鲁伟,吴承亮. 中国骨伤. 2015(07)
[3]Wnt信号通路与椎间盘的发展[J]. 梁广胜,殷明,刘玉亮,魏强强,周荣平,殷嫦嫦. 中国矫形外科杂志. 2014(05)
[4]白藜芦醇恢复去分化正常髓核细胞表型的实验研究[J]. 沈皆亮,胡侦明,钟小明,王大武,徐林飞. 中国修复重建外科杂志. 2013(05)
[5]白藜芦醇通过上调SIRT1促进退变髓核细胞胞外基质合成[J]. 沈皆亮,胡侦明,钟小明,张晓军,江维. 细胞与分子免疫学杂志. 2012(11)
[6]沉默信息调节因子2同源蛋白1通过Akt/PKB通路抑制人退变椎间盘髓核细胞凋亡[J]. 王大武,胡侦明,郝杰,何斌,甘强,钟小明,沈皆亮,方济. 生物化学与生物物理进展. 2012(06)
[7]TNF-α、IL-1β在退变椎间盘组织中的表达及其意义[J]. 张林华,卜海富. 临床骨科杂志. 2010(01)
本文编号：2924339
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