HO-1基因过表达阻断MLK3/MKK7/JNK3信号通路对脊髓损伤的保护作用

发布时间：2020-12-19 05:05

　　目的:1.脊髓神经元的体外分离、原代培养及鉴定;2.构建血红素加氧酶-1（Heme oxygenase-1,HO-1）过表达重组腺相关病毒（Adeno-associated virus,AAV）载体（AAV-HO-1）;3.探讨AAV-HO-1对脊髓神经元氧化应激损伤后MLK3/MKK7/JNK3信号通路的影响;4.探讨AAV-HO-1对大鼠脊髓损伤（Spinal cord injury,SCI）后MLK3/MKK7/JNK3信号通路的影响。方法:1.采用胰蛋白酶消化联合机械法分离胚胎脊髓神经元,应用β-tubulin-III染色和神经元核心抗原（Neuron specific nuclear protein,NeuN）免疫荧光染色法鉴定脊髓神经元;2.构建AAV-HO-1;3.采用H₂O₂建立原代培养脊髓神经元氧化应激损伤模型;通过蛋白质印迹（Western Blot）和免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation,Co-IP）检测脊髓神经元氧化应激损伤后HO-1、MLK3、p-MLK3、MKK7、p-MKK7、JNK3、p-J... 

【文章来源】：福建医科大学福建省

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

原代培养脊髓神经元第5d×200

图 1-2 原代培养脊髓神经元的鉴定A：细胞核染色 B：β tubulin-III 染色情况 C：图片融合后3 原代脊髓神经元 NeuN 免疫荧光染色经过 NeuN 染色后细胞核染成蓝色，脊髓神经元染成红色，结果如下。图 1-3 原代脊髓神经元 NeuN 免疫荧光染色A：细胞核染色 B：脊髓神经元染色情况 C：图片融合后三 讨论

图 1-3 原代脊髓神经元 NeuN 免疫荧光染色A：细胞核染色 B：脊髓神经元染色情况 C：图片融合后三 讨论1 神经元的培养体外培养脊髓神经元是 SCI 病理生理、损伤修复以及相关细胞信号通路等的研究基础。但是，体外培养神经元对环境变化非常敏感。因而获得高纯度、高细胞丰度的脊髓神经元对于之后的实验尤为重要。首先我们选取了孕 16 d 的大鼠胚胎，此时胎鼠脊髓神经元未完全分化、易于存活，且神经系统发育尚未成熟，神经胶质细胞较少，因而能分离到纯度较高的脊髓神经元[16]。其次，我们进行神经元的培养，神经元为贴壁培养细胞，需粘附在基质上生长，预先包被多聚赖氨酸有助于神经元贴壁。目前神经元的体外培养体系一般分为两种：一种是 DMEM/F12+胎牛血清的培养体系，

【参考文献】：
期刊论文
[1]腺相关病毒介导血红素加氧酶-1基因转移对大鼠脊髓损伤的保护作用[J]. 林文平,王思远,郑煜晖,柯庆峰,施进兴,肖丹蕊.  中华实验外科杂志. 2018 (01)
[2]脊髓损伤基因治疗的研究现状和进展[J]. 杨彦玲.  临床神经病学杂志. 2011(06)



本文编号：2925308