不同miR-146a表达水平Treg细胞体内回输对小鼠心脏移植免疫排斥反应的影响

发布时间：2020-12-19 15:42

　　目的本研究的主要目的是探讨体内回输正常Treg细胞及改变miR-146a表达水平的Treg细胞对小鼠心脏移植免疫排斥反应的影响。方法首先我们在体外采用流式细胞仪分选近交系C57小鼠脾脏中的CD4⁺CD25⁺Treg细胞,然后把分选的细胞应用磁珠原理的美天旎扩增试剂盒联合高浓度IL-2进行体外扩增。参照文献及课题组前期实验,为达到上调或下调Treg细胞中miR-146a的表达水平的目的,我们分别通过miR-146a agomir及antagomir进行细胞调控。建立小鼠腹部异位心脏移植模型,分别设立生理盐水对照组,正常Treg组,miR-146a上调组,和miR-146a下调组。各组模型建立完成后立即通过小鼠阴茎背静脉注射回输相应Treg细胞（细胞数量为1×10⁶）,观察供心存活情况测得生存曲线,在术后第7天取供心进行病理学分析,采用流式细胞术检测各组受体脾脏中T细胞亚群,为了解供心中细胞因子的表达水平的变化采用RT-PCR检测IFN-γ、IL-4和IL-17。结果1.流式分选所得Treg细胞纯度为89.5%。经扩增试剂盒... 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

实验第一部分流程图

1.2 流式分选示意图1.1.4.3 体外扩增 CD4+CD25+调节 T 细胞目前对于 CD4+CD25+调节 T 细胞获得有多种方法，但是不能满足用体外扩增有多种办法，主要都是采用磁珠刺激的方法，我们主要依靠试剂IL-2，试剂盒选用为多的美天旎[45]。(1)扩增试剂盒相关原理：扩增原理是磁珠。扩增比例沿用课题组前期实验基数为 3：1，并按照 2000加入 rIL-2。(2)操作步骤：1).样本制备将 Treg 细胞充分吹匀。2) 扩增试剂的预处理①将扩增试剂充分混匀，并按 6×107/ml 的浓度移到 10ml 离心管中。②450μL 完全培养基洗涤一次。

天津医科大学硕士学位论文.1.5 统计方法全部实验数据均采用 SPSS19.0 软件包对实验结果进行统计学处理,P<水平有统计学意义。数据采用单因素方差分析表示。.2 结果.2.1 分选及扩增前后 Treg 细胞活性纯度及 miRNA146a 表达水式测定.2.1.1 活性、纯度检测Treg 细胞经体外扩增试剂盒联合高浓度 IL-2 进行扩增。Treg 细胞的数迅速增长,体外细胞数比扩增前提高 10 倍。通过流式细胞术检测纯化和reg 细胞和 Treg,CD4CD25 双阳性细胞纯度为 89%和 93.5%。

【参考文献】：
期刊论文
[1]小鼠腹部心脏移植模型建立及并发症预防[J]. 郁雷,高丽.  中国胸心血管外科临床杂志. 2014(02)
[2]CD4+CD25+调节性T细胞体内外培养扩增方法的研究进展[J]. 王永磊,朱志军.  器官移植. 2012(05)
[3]小鼠腹部异位心脏移植模型制作的改良(附视频)[J]. 刘小孙,张富祥,容松.  中华移植杂志(电子版). 2012(01)

硕士论文
[1]不同剂量地西他滨对调节性T细胞的影响[D]. 李庆贺.天津医科大学 2012



本文编号：2926158