突变型低氧诱导因子-1α修饰BMSC来源的外泌体对炎性因子诱导软骨细胞凋亡的保护作用及联合再生支架治疗家兔早期软骨缺损的

发布时间：2020-12-26 00:44

　　目的探讨突变型HIF-1α（hypoxia-inducible factor-1α,低氧诱导因子-1α）修饰的骨髓间充质干细胞（BMSC）来源的外泌体（BMSC-Exo）对关节软骨的保护作用及联合小牛真皮来源软骨再生支架治疗家兔早期软骨部分缺损。方法体外实验:BMSC以及软骨细胞的培养;突变型HIF1-α修饰BMSC分泌的外泌体（BMSC-Exomu）及正常BMSC分泌的外泌体（BMSC-Exonor）用超高速离心法提取;Western blot（免疫蛋白印迹技术）检测BMSC-Exo的表面蛋白标记物;炎症介质TNF-α诱导软骨细胞凋亡,给予BMSC-Exomu和BMSC-Exonor,阿利辛蓝染色察看软骨基质的分泌情况;MTT实验检测软骨细胞活性情况;JC-1线粒体膜电位检测软骨细胞凋亡情况;Western blot分析MAPKs（丝裂原活化蛋白激酶）和AKT（苏氨酸激酶）细胞信号通路在BMSC-Exos调节细胞凋亡过程中的作用。体内实验:12只新西兰兔均行前交叉韧带断离术及部分软骨层缺损术,构建软骨部分缺损动物模型,将其分为四组,分别为单纯缺损组、支架植入治疗组、支架+BMSC-E... 

【文章来源】：锦州医科大学辽宁省

【文章页数】：45 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

细胞培养及HIF1α基因转染注：BMSC细胞培养（×100）（图1.a）及兔软骨细胞培养（×100）（图1.b）；

容物为 BMSC-Exos。图2：外泌体电镜观察及外泌体表面特异性蛋白分子标记物。注：扫描电镜下观察外泌体形态（图2.a; scale bars=100nm）；BMSC-Exonor表面特异性蛋白分子标记物CD63，CD81（图2.b）三、软骨细胞摄取外泌体DAPI- 软 骨 细 胞 共 培 养 DIL-BMSC-Exo 的 荧 光 显 微 镜 观 察 ， DIL 标 记BMSC-Exos（红色）与DAPI标记软骨细胞（蓝色）共培养。起始共孵育时观察，结 果一、细胞培养

s-Exos（×400）注：孵育起始荧光显微镜下观察（图 3.a）；孵育 3 小时后荧光显微镜下观察（图3.b）；孵育 6 小时后荧光显微镜下观察（图 3.c）四、细胞存活实验（一）阿利新蓝染色实验正常软骨细胞组，软骨细胞数量最少，软骨细胞分泌的软骨糖胺多糖（GAG）最少；BMSC-Exonor处理组有少量新生软骨细胞，分泌少量软骨糖胺多糖；BMSC-Exomu处理组软骨细胞数量最多，软骨细胞分泌的软骨糖胺多糖最多。（二）MTT实验48h中各组细胞的吸光度值，与正常细胞组相对照，TNF-α组吸光度值呈下降趋势，显著低于对照组（P=0.001）；BMSC-EXonor组吸光度值上升趋势，略高于对照组（P=0.008）、BMSC-Exomu组吸光度值上升趋势，明显高于对照组（P=0.001）。

【参考文献】：
期刊论文
[1]模拟微重力动态培养构建组织工程化软骨修复猪关节软骨缺损研究[J]. 林威,陈洁琳,刘威,杨坤,王大明,段莉,朱伟民,王大平.  中国运动医学杂志. 2016(05)
[2]外泌体的生物学特性及临床应用的研究进展[J]. 李晓,刘玲英,柴家科.  解放军医学院学报. 2015(10)
[3]脱细胞真皮基质制备及其生物相容性研究[J]. 綦惠,杰永生,陈磊,江建,高新生,孙磊.  中国修复重建外科杂志. 2014(06)
[4]应用小牛皮制备软骨修复载体的脱毛-脱细胞-结构改建工艺探讨[J]. 綦惠,孙磊,陈磊,江建,杰永生,高新生.  中国矫形外科杂志. 2014(02)



本文编号：2938698