慢病毒介导miR-146a在骨髓间充质干细胞中的表达实验研究

发布时间：2021-01-08 07:08

　　目的:椎间盘突出后继发的人体自身免疫反应和炎性刺激被认为是腰椎间盘突出症患者腰背部及下肢疼痛,活动受限等症状出现的主要原因。同时miR-146a被证明能有效抑制体内炎症反应。本实验是通过将miR-146a基因转染至BMSCs中得到稳定表达的重组干细胞,实现miR-146a在BMSCs中稳定表达的可调控性,为下一步研究miR-146a基因修饰BMSCs在治疗椎间盘突出症导致的腰背部疼痛奠定实验基础。方法:通过全骨髓贴壁筛选法提取、分离SD大鼠BMSCs,并取第三代BMSCs通过流式细胞技术检测BMSCs表面抗原CD90、CD106、CD45来鉴定BMSCs。取第三代BMSCs转染携带miR-146a基因的慢病毒载体,转染后观察EGFP表达情况及感染率,应用qRT-PCR、Western Blot技术分别检测miR-146a基因及其靶蛋白IRAK-1、TRAF6表达情况。结果:经流式细胞技术鉴定第三代BMSCs中表达CD90、CD106不表达CD45。携带miR-146a基因的慢病毒载体转染BMSCs的最佳MOI值为50,转染率可达80%;EGFP荧光表达48h后开始逐渐增强;qRT-PC... 

【文章来源】：新疆医科大学新疆维吾尔自治区

【文章页数】：46 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

大鼠BMSCs的体外培养（×100）

第三代大鼠BMSCs（×100）

MOI=50 时重组慢病毒转染 BMSCsA 后 A：24h（×100）B：48（×100）C：96h（×100）Fig 4 When MOI=50, recombinant lentivirus was transfected into BMSCsA：after 24h (×100) B: after 48h (×100) C: after 96h (×100)C: 96h (x 100)


本文编号：2964161