缺氧通过HIF-1α/YAP信号对大鼠生长板软骨细胞软骨表型维持的影响

发布时间：2021-01-19 21:57

　　第一部分缺氧对大鼠生长板软骨细胞软骨表型的影响目的:研究缺氧刺激对大鼠生长板软骨细胞软骨表型的影响方法:1.分离获得大鼠生长板软骨细胞,并利用1%氧浓度刺激大鼠生长板软骨细胞。2.利用CCK-8（Cell Counting Kit-8,细胞计数试剂盒-8）法检测1%氧浓度缺氧刺激对生长板软骨细胞增殖的影响。3.利用RT-PCR（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,逆转录-聚合酶链反应）检测时间梯度下1%氧浓度缺氧刺激后生长板软骨细胞中SOX9（sexdetermining region Y-type high mobility group box protein 9,性别决定区Y型高迁移率族蛋白9）、CollagenⅡ（Ⅱ型胶原）和Aggrecan（聚集蛋白聚糖）基因水平表达的影响。4.利用Western blotting（免疫印迹实验）和免疫荧光的方法检测时间梯度下1%氧浓度缺氧刺激后生长板软骨细胞SOX9、CollagenⅡ和Aggrecan蛋白水平表达变化。结果:1.缺氧对生长板软骨细胞生长曲线并无明显影响。2.缺氧能够... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

生长板软骨细胞增殖曲线。在常氧条件(21%O2)和缺氧(1%O2)培养1天、2天和3天,CCK-8细胞增殖实验检测软骨细胞生长曲线。数据表示为平均值±标准偏差(n=3)。

为了研究缺氧对生长板软骨细胞软骨特异性标记物基因水平表达的影响,我们利用RT-PCR的方法检测SOX9、CollagenⅡ和Aggrecan在内的软骨特异性标记物的基因水平表达情况。如图所示,RT-PCR结果显示缺氧促进SOX9、CollagenⅡ和Aggrecan基因水平的表达,并且SOX9和Aggrecan的基因水平表达在缺氧刺激4小时时候达到峰值。在缺氧(1%O2)培养0,2,4和8小时的软骨细胞中SOX9、CollagenⅡ和Aggrecan的mRNA表达。数据表示为平均值±标准偏差(n=3)并归一化至对照组(0小时)。与对照组(0小时)相比,*P<0.05,**P<0.01和***P<0.001。

为了研究缺氧对生长板软骨细胞SOX9、CollagenⅡ和Aggrecan蛋白水平的表达的影响,我们利用Western blotting和免疫荧光的方法检测SOX9、CollagenⅡ和Aggrecan蛋白水平表达情况。如图2A所示SOX9、CollagenⅡ和Aggrecan的蛋白表达水平在软骨细胞缺氧反应中显着增加。值得注意的是,当软骨细胞在缺氧条件下干预达8小时后,SOX9、CollagenⅡ和Aggrecan的蛋白表达水平与干预4小时相比有所下调,但SOX9和CollagenⅡ的表达水平与对照组相比是有所增加(图2A和B)。然后通过免疫荧光研究SOX9和CollagenⅡ的表达水平,与蛋白质和基因表达结果一致,通过暴露于缺氧条件下4小时,软骨细胞中的SOX9和CollagenⅡ沉积显着增加(图2C和D)。这些结果表明,缺氧诱导软骨细胞特异性标记物在软骨细胞中的表达,从而促进软骨形成表型的维持。结论


本文编号：2987782