ADSC-exo对肉芽组织成纤维细胞增殖影响及修复裸鼠皮肤缺损的研究

发布时间：2021-01-23 18:53

　　目的:1.目前针对骨科患者后期难愈创面或组织缺损,传统治疗方法效果差、愈合时间长,本实验拟在找到一种来源于自体细胞或者组织的治疗方式,来加快创面的愈合,达到迅速封闭难愈创面的目的。2.本实验提取脂肪间充质干细胞来源外泌体（adipose mesenchymalstem cellsderived exosomes,ADSC-exo）,对肉芽组织来源的成纤维细胞进行干预,并对裸鼠全层皮肤缺损进行治疗,试图找到一种可以促进愈合,减少瘢痕形成的治疗方式。方法:1.取手术废弃的脂肪组织,进行分离、培养ADSC。免疫荧光染色检测分离的细胞表面免疫标记物CD105、CD90和CD45的表达情况;将分离的细胞向成脂、成骨、成软骨诱导分化。2.采用超滤浓缩离心法分离ADSC-exo,透射电镜下观察其形态;Nanosight检测外泌体的分布及大小;Western blot检测外泌体相关蛋白标志物CD81、CD63的蛋白表达。取肉芽组织成纤维细胞并分离、鉴定。3.通过细胞划痕实验检测ADSC-exo能否增加成纤维细胞的迁移能力;通过Transwell培养基检测ADSC-exo和ADSC在不同时间点对成纤维细... 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

【文章页数】：110 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

原代人脂肪充质干细胞的形态学观察,A示培养3天,B示培养8天结果.Figure1-1.ThemorphologyofhADSC,Ashowed3days,Bshowed8dayscultureresults.

图 1-1. 原代人脂肪充质干细胞的形态学观察,A 示培养 3 天, B 示培养 8 天结果.Figure 1-1. The morphology of hADSC,Ashowed 3 days, B showed 8 days culture results.1.2.2 hADSC 成脂、成骨、成软骨诱导结果1.2.2.1 hADSC 成脂诱导结果:hADSC 在向脂肪细胞诱导分化的过程中，开始时细胞浆中出现细小的脂滴，随着培养时间延长，脂滴数量增多，体积增大；诱导第 14 天时，油红 O 染色呈现红色，证明该物质为脂肪滴。对照组无明显变化，油红 O 染色呈阴性，这提示诱导的 ADSC 有向脂肪细胞分化的趋势(图 1-2)。

天津医科大学博士学位论文 一、脂肪间充质干细胞的分离与鉴定1.2.2.2 hADSC 成骨诱导结果:hADSC 向成骨细胞诱导分化后第 7 天，胞体增大，突起增多，胞核变大变圆细胞，出现细小的钙化结节，第 21 天染色后细胞周围有明显的钙沉积，茜素红染色可形成红色沉淀。对照组细胞未出现相应变化，仍为长梭形类成纤维细胞状，这提示诱导的 ADSC 有向成骨细胞分化的趋势(图 1-3)。


本文编号：2995747