ADSCs来源的Exosomes提高脂肪移植存活率的研究
发布时间：2021-01-29 14:34
背景:近年来,自体脂肪移植（Autologous fat graft,AFT）在整形美容外科发挥日益重要的作用,作为增加待修复区域局部软组织体积的重要手段,现已被广泛应用于组织器官修复重建、丰胸、丰臀、面部脂肪填充除皱、颞部（太阳穴）凹陷、面颊部凹陷、双侧面部不对称,甚至是乳腺癌病人术后乳房重建及其他相关术式[1-3],且具备生物相容性好、获取简便、来源广泛、填充效果好和创伤小等显著优势,是目前公认较为安全和有效的手术方法[4-6]。但高吸收率、低存活率等不足[7],限制了该技术的进一步应用和推广。因此脂肪移植手术的关键就是提高自体移植脂肪成活率。脂肪干细胞（Adipose-derived Stem Cells,ADSCs）是一种来源于脂肪组织并且具有多向分化潜能和增殖能力的间充质干细胞。目前已有研究证实,ADSCs在提高移植脂肪存活率等方面发挥着重要作用。它主要通过促进VEGF、bFGF、MMP-9、PDGF、TGF-β等促血管生成因子的分泌,以及直接分化为新生血管内皮细胞及血管周围细胞,使得移植脂肪能够在受区更快获得...
【文章来源】：福建医科大学福建省
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
hADSCs表面标记物
24图1.3镜下ADSCsP4正常培养及去血清培养对比在去血清的情况下，ADSCs仍然保持着正常的形态及特征，培养液无浑浊等情况出现，细胞生长速度放缓3.4hADSCs来源exosomes提取收集足量第四代饥饿去血清培养48h后的ADSCs上清液，使用最为经典的差速离心法来提取exosomes；在最后可以得到透明胶冻样的可见沉淀，即为我们获得的hADSCs来源的exosomes沉淀；最后使用PBS多次重复冲洗离心管底及重悬沉淀后放入-80℃冰箱保存。A、B：ADSCs来源的exosomes沉淀图1.4经典的差速离心法获取的细胞上清沉淀3.5ADSCs来源的exosomes电镜检测等体积的exosomes悬液与4%PFA混合，经过戊二醛固定，蒸馏水冲洗后利用双氧釉进行负染，干燥后进行电镜观察。在使用同样体积的ADSCs培养上清液进行离心后，重悬的exosomes在电镜下可以看出经过48h去血清饥饿培养所获得的盘状囊泡结构的exosomes在镜下单位视野内含量较ADSCs正常培养液所能观察到的盘状囊泡结构的exosomes更多，并且该盘状囊泡的直径多集中
25在30-150nm范围内。A:正常培养exosomes80kvB:去FBS培养exosomes80kV图1.5ADSCs来源exosomes电镜检测经过48h去血清饥饿培养所获得的盘状囊泡结构的exosomes在镜下单位视野内含量较ADSCs正常培养液所能观察到的盘状囊泡结构的exosomes更多，并且该盘状囊泡的直径多集中在30-150nm范围内。3.6hADSCs来源的exosomes免疫印迹试验（WesternBlot）将获取的hADSCs来源的exosomes经过裂解、定量后，计算合适的计量加入至电泳液及浓缩胶已经配置好的上样孔中，与Marker在同一张胶上进行电泳，电泳完毕进行转膜及免疫反应，最后通过曝光得到如下显影。可以看到它既表达ADSCs的相应蛋白（CD44、CD34、CD90），又表达CD63这一exosomes特异性的标志蛋白。A:CD44B:CD34(120KD)C:CD90D:Ago2E:TSG101F:CD63G:EPCAM图1.6ADSCs来源exosomes的WesternBlot检测exosomes既表达ADSCs的相应蛋白（CD44、CD34、CD90），又表达
本文编号：3007051
【文章来源】：福建医科大学福建省
【文章页数】：76 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
hADSCs表面标记物
24图1.3镜下ADSCsP4正常培养及去血清培养对比在去血清的情况下，ADSCs仍然保持着正常的形态及特征，培养液无浑浊等情况出现，细胞生长速度放缓3.4hADSCs来源exosomes提取收集足量第四代饥饿去血清培养48h后的ADSCs上清液，使用最为经典的差速离心法来提取exosomes；在最后可以得到透明胶冻样的可见沉淀，即为我们获得的hADSCs来源的exosomes沉淀；最后使用PBS多次重复冲洗离心管底及重悬沉淀后放入-80℃冰箱保存。A、B：ADSCs来源的exosomes沉淀图1.4经典的差速离心法获取的细胞上清沉淀3.5ADSCs来源的exosomes电镜检测等体积的exosomes悬液与4%PFA混合，经过戊二醛固定，蒸馏水冲洗后利用双氧釉进行负染，干燥后进行电镜观察。在使用同样体积的ADSCs培养上清液进行离心后，重悬的exosomes在电镜下可以看出经过48h去血清饥饿培养所获得的盘状囊泡结构的exosomes在镜下单位视野内含量较ADSCs正常培养液所能观察到的盘状囊泡结构的exosomes更多，并且该盘状囊泡的直径多集中
25在30-150nm范围内。A:正常培养exosomes80kvB:去FBS培养exosomes80kV图1.5ADSCs来源exosomes电镜检测经过48h去血清饥饿培养所获得的盘状囊泡结构的exosomes在镜下单位视野内含量较ADSCs正常培养液所能观察到的盘状囊泡结构的exosomes更多，并且该盘状囊泡的直径多集中在30-150nm范围内。3.6hADSCs来源的exosomes免疫印迹试验（WesternBlot）将获取的hADSCs来源的exosomes经过裂解、定量后，计算合适的计量加入至电泳液及浓缩胶已经配置好的上样孔中，与Marker在同一张胶上进行电泳，电泳完毕进行转膜及免疫反应，最后通过曝光得到如下显影。可以看到它既表达ADSCs的相应蛋白（CD44、CD34、CD90），又表达CD63这一exosomes特异性的标志蛋白。A:CD44B:CD34(120KD)C:CD90D:Ago2E:TSG101F:CD63G:EPCAM图1.6ADSCs来源exosomes的WesternBlot检测exosomes既表达ADSCs的相应蛋白（CD44、CD34、CD90），又表达
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