氢气对大鼠脑缺血/再灌注损伤线粒体功能及神经细胞凋亡的影响

发布时间：2021-02-01 07:00

　　目的:研究氢气对大鼠脑缺血/再灌注损伤脑皮质区线粒体功能及神经细胞凋亡的影响。方法:本试验动物选用雄性SD大鼠,共计78只。采用线栓法栓塞左侧大脑中动脉,栓塞2 h后拔除线栓,再灌注24 h建立大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤模型。应用随机数字表法将雄性SD大鼠分为假手术组（Sham组）、脑缺血/再灌注损伤模型组（Mod组）、氢气治疗组（H₂组）（n=26）。再灌注24 h后进行神经功能缺损评分来评估大鼠神经功能状态;应用2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色检测脑缺血皮质区梗死面积;应用尼氏染色观察脑缺血皮质区神经细胞形态变化;应用荧光分光光度法测定缺血区神经细胞线粒体活性氧生成率（ROS）;应用JC-1染色法检测缺血皮质区神经细胞线粒体膜电位水平（ψm）的变化;应用荧光酶标仪检测缺血皮质区神经细胞线粒体通透性转换孔（MPTP）开放度。应用原位末端标记（TUNEL）法检测缺血区神经细胞亡并计算凋亡指数（AI）;应用蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax的表达量;结果:与Sham组相比,Mod组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死面积、神经细胞线粒体ROS生成率、... 

【文章来源】：桂林医学院广西壮族自治区

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

各组大鼠TTC染色梗死面积

2.3 尼氏染色结果用尼氏染色来观察 SD 大鼠脑 I/R 损伤后神经细胞形态以及神经细构的变化。在倒置荧光显微镜下观察，sham 组神经元胞体排列紧密，蓝染，核圆呈空泡样，胶质细胞呈蓝色，细小颗粒状。Mod 组神经元萎染，部分神经元消失，细胞间隙增宽，坏死区见增生明显的胶质细组神经元胞体较完整，细胞排列较紧密，核较饱满，正常神经元数目多于 Mod 组。见图 2。

图 3 线粒体活性氧生成率Figure 3 Mitochondrial reactive oxygen species generation rate胞线粒体膜电位水平检测结果电位水平可以反映线粒体功能，△ψm 处于高水平以荧光强度的大小代表△ψm 水平的高低。结果显 组△ψm 水平降低（P＜0.01）；与 Mod 组相比，加P＜0.01），见图 4a，表 3。在倒置荧光显微镜下电位水平；绿色荧光代表低膜电位水平。结果显示组红色荧光减弱，绿色荧光增强，膜电位降低；与 M增强，绿色荧光减弱，膜电位增强，见图 4b。


本文编号：3012379