HIC1缺失通过肿瘤细胞/成纤维细胞间的串话效应促进乳腺癌的发展

发布时间：2021-02-06 02:16

　　乳腺癌（BrCa）是全世界范围内女性发病率和死亡率最高的恶性肿瘤。尽管系统性的治疗方法已经降低了乳腺癌死亡率,但仍然伴随着很高的复发和转移。因此,探索乳腺癌发展的分子机制将有助于对其的诊断和治疗。在本研究中我们发现,小鼠乳腺导管条件性敲除癌高甲基化基因1（HIC1）能够促进肿瘤形成初期的恶性转化。同时共培养实验揭示了HIC1缺失的乳腺癌细胞能够诱导微环境中乳腺成纤维细胞的活化。进一步,通过RT-qPCR,ELISA,Luciferase以及ChIP实验,我们发现趋化因子CXCL14是HIC1直接调控的下游靶点。HIC1缺失的乳腺癌细胞能够分泌更多的趋化因子CXCL14到肿瘤微环境中,结合位于乳腺成纤维细胞表面新的受体GPR85,活化Erk1/2,Akt和neddylation通路,从而介导成纤维细胞的活化。另外,通过细胞因子微阵列分析,我们发现被CXCL14活化的成纤维细胞能够分泌更多的趋化因子CCL17,通过CCL17/CCR4轴诱导乳腺癌细胞的上皮-间充质转化（EMT）从而促进乳腺癌的发展。最后,通过乳腺组织芯片分析,我们确定了HIC1-CXCL14-CCL17回路确实与乳腺癌的恶... 

【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：130 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
全文缩略词中英文对照
1 绪论
    1.1 肿瘤相关成纤维细胞
    1.2 癌高甲基化基因1（HIC1）
    1.3 趋化因子CXCL14
    1.4 孤儿G蛋白偶联受体GPR85
    1.5 趋化因子CCL17及其受体CCR4
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 主要仪器设备
        2.1.2 主要试剂、耗材（商品化）
        2.1.3 实验室自配试剂
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养与冻存
        2.2.2 条件性基因敲除小鼠构建
        2.2.3 小鼠基因型鉴定
        2.2.4 Whole-mount乳腺洋红染色
        2.2.5 乳腺组织的油红染色
        2.2.6 苏木素-伊红染色（H&E染色）
        2.2.7 免疫组织化学染色（IHC）
        2.2.8 石蜡切片的免疫荧光
        2.2.9 细胞的免疫荧光
        2.2.10 原代乳腺成纤维细胞的分离和培养
        2.2.11 免疫印迹（Western blot）
        2.2.12 血管拟态形成
        2.2.13 质粒转化和小抽
        2.2.14 稳转质粒和细胞的构建
        2.2.15 质粒中抽
        2.2.16 RNA的提取
        2.2.17 逆转录及实时荧光定量PCR（RT-qPCR）
        2.2.18 双荧光素酶报告基因实验（Luciferase）
        2.2.19 基因定点突变
        2.2.20 染色质免疫共沉淀（ChIP）
        2.2.21 酶联免疫吸附测定（ELISA）
        2.2.22 人类蛋白质组微阵列芯片
        2.2.23 亲和素pull-down
        2.2.24 钙内流测定
125I标记的配体-受体结合力测定">        2.2.25 ¹²⁵I标记的配体-受体结合力测定
        2.2.26 肿瘤细胞与成纤维细胞共培养
        2.2.27 细胞因子微阵列芯片
        2.2.28 细胞转移和侵袭分析
        2.2.29 siRNA转染
        2.2.30 流式分析
        2.2.31 乳腺原位移植瘤的建立和活体成像
        2.2.32 乳腺癌组织芯片
        2.2.33 临床数据库分析
        2.2.34 动物和人体实验伦理批准
        2.2.35 数据统计与分析
3 结果
    3.1 HIC1缺失诱导了小鼠乳腺导管的增生和泌乳缺陷
    3.2 HIC1缺失的乳腺癌细胞诱导间质中乳腺成纤维细胞活化
    3.3 CXCL14是HIC1直接调控的下游靶基因
    3.4 HIC1缺失的乳腺癌细胞分泌趋化因子CXCL14介导乳腺成纤维细胞活化
    3.5 CXCL14通过活化Erk1/2,Akt和neddylation通路诱导乳腺成纤维细胞活化
    3.6 GPR85是一个新的CXCL14的功能性受体
    3.7 CXCL14活化的成纤维细胞分泌趋化因子CCL17促进乳腺癌细胞转移
    3.8 癌相关成纤维细胞分泌CCL17促进乳腺癌的原位肺转移
    3.9 HIC1-CXCL14-CCL17回路与乳腺癌病人恶性发展相关
4 结论与讨论
5 参考文献
6 附录
7 致谢
8 攻读博士学位期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]Cancer incidence and mortality in China, 2014[J]. Wanqing Chen,Kexin Sun,Rongshou Zheng,Hongmei Zeng,Siwei Zhang,Changfa Xia,Zhixun Yang,He Li,Xiaonong Zou,Jie He.  Chinese Journal of Cancer Research. 2018(01)



本文编号：3019981