宽泛围PCR和宏基因组二代测序方法在人工关节感染微生物诊断中的应用

发布时间：2021-02-16 00:46

　　人工关节感染（PJI）是人工关节置换术后最严重的并发症之一,PJI需要多次手术和长时间抗生素治疗,给患者和社会带来严重负担。及时、准确的微生物诊断是PJI治疗成功的关键。由于微生物在假体表面形成生物膜、浮游菌量少、微生物培养困难以及采样使用抗生素等原因,传统的微生物培养方法对病原微生物检出的阳性率低,且培养时间较长。临床常用的广谱的微生物分子诊断方法包括宽泛围PCR（BR-PCR）和宏基因组二代测序（mNGS）,可不依赖培养、快速检出PJI标本中的病原微生物。这两种方法对关节液、假体周围组织及超声裂解液中病原微生物检出能力以及对PJI的诊断价值如何仍未明确。第一章宽泛围PCR方法对人工关节感染的微生物诊断价值【目的】研究宽泛围PCR（BR-PCR）方法对人工关节感染（PJI）患者关节液、假体周围组织和超声裂解液标本中的病原菌检出能力和对PJI的诊断价值。【方法】回顾性纳入人工关节翻修患者67例,分为PJI组和无菌性失败（AF）组。采样前均停用抗生素2周以上,每例患者均采集关节液、假体周围组织以及取出的假体的超声裂解液,所有标本类型均分别行微生物培养和BR-PCR,BRPCR扩增产物使用... 

【文章来源】：福建医科大学福建省

【文章页数】：119 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

超声裂解过程示意图

20ABCDEF图1.1超声裂解过程示意图。图A取出的假体放入无菌可密封盒中，灭菌生理盐水没过假体表面；图B密封盒置于振荡仪上振荡，间歇性转动方向；图C密封盒置于超声清洗机的水浴槽内行超声裂解，间歇性转动方向；图D取超声裂解液离心后，弃上清取沉渣液；图E沉渣液行血平板培养；图F沉渣液行血培养瓶培养3.2微生物培养与鉴定液体标本（关节液、超声裂解液）取0.1ml使用血平板在培养箱行需氧和厌氧培养（35-37°C，5-7%CO2），需氧培养5-6天，厌氧培养10-14天（每日观测，培养阳性即停止）。余下的标本依次打入BD厌氧瓶、需氧瓶，在BD自动培养箱内培养（35-37°C，5-7%CO2，需氧培养5-6天，厌氧培养10-14天），报警后取出肉汤在血平板次代培养。假体周围组织剪碎并加入肉汤研磨后涂片行需氧菌、厌氧菌培养，培养条件与液体标本相同。使用MALDI-TOF质谱和VITEKII生化鉴定系统行微生物种属和药敏鉴定。血平板或血培养瓶培养阳性定义为：2份以上关节液或组织培养出相同微生物；超声裂解液培养阳性定义为：培养出如金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、链球菌属等高

PCR扩增产物凝胶电泳分析图

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3035830