巨噬细胞外泌体miRNA介导肌腱粘连的机制研究

发布时间：2021-02-18 05:28

　　目的:创伤后肌腱粘连发生率高,导致运动功能障碍,临床治疗尚缺乏有效靶点。巨噬细胞是组织粘连的调控者,可通过细胞间“通讯”的方式改变靶细胞的功能和表型,而由外泌体（Exosome）介导的microRNAs传递在细胞间“通讯”以及疾病发生发展中具有重要作用。本研究从Exosome介导的细胞间“通讯”的角度出发,探索巨噬细胞来源的Exosomal-microRNA在肌腱粘连形成中的作用及分子机制,为创伤后肌腱粘连的防治提供新的理论依据和分子靶标。方法:首先,对比野生型小鼠和巨噬细胞缺失小鼠（药物构建）中趾深屈肌腱术后的粘连程度（从大体观、生物力学、组织学及蛋白表达评估）,阐明巨噬细胞在肌腱粘连形成中的作用;然后,体外提取骨髓来源的巨噬细胞的外泌体,回输巨噬细胞缺失小鼠体内,阐明巨噬细胞来源的外泌体在肌腱粘连形成中的作用;随后,体外实验进一步证明巨噬细胞来源外泌体对成纤维和肌腱细胞功能的影响;之后,利用二代测序技术确定巨噬细胞来源外泌体内microRNAs含量,并利用体外转染实验验证含量最高的microRNA-21-5p对成纤维和肌腱细胞功能的影响;最后,利用生物信息学分析预测microRNA... 

【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：105 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

实验方案模式图

按照文献所报道方法,利用跖趾关节的活动角度来测定趾深屈肌腱的滑动功能[99,101]。每组取5个样本,于膝关节水平处离断后肢,并将皮肤剥脱移至踝关节水平。将趾深屈肌腱胫骨近端水平游离并显露,固定于自制夹具;将胫骨固定于力学测试仪的固定器,于趾深屈肌腱近端逐渐加载0-19g的重量,在每次加载重量时拍摄数字图像,从数字图像测量跖趾关节的屈曲角度。跖趾关节屈曲角度对应于施加19g重物时的屈曲度,未受伤的肌腱在19g施重时跖趾关节可完全屈曲[23]。滑动阻力基于所施加载荷范围的跖趾关节弯曲角度的变化,越高的滑动阻力,表明滑动功能受损和粘连形成,每组五个样本,测量示意图如图2所示。2.2.2.6肌腱生物力学测评

肌腱滑动测试后,按照文献报道方法测定肌腱拉伸强度[99,100]。胫骨在踝关节水平移除,将趾深屈肌腱近端和远端部分分别固定在Instron 8841DynaMightTM轴向液压测试仪(Instron Corporation,Norwood,MA)上的定制夹具,以30mm/分钟的速率测试肌腱的张力直至肌腱被拉断,自动记录肌腱断裂时的最大负载,同时在力-位移曲线的线性区域的斜率处计算刚度,每组五个样本,测量示意图如图3所示。2.2.2.7组织学评估


本文编号：3039101