TGF-β1调控成纤维细胞P311转录的机制研究

发布时间：2021-03-26 00:28

　　研究背景瘢痕形成是创面修复过程中难以避免也十分棘手的问题,深度烧伤等严重皮肤损伤后均会有不同程度的瘢痕形成,这严重影响了伤处的外观及后期功能活动。增生性瘢痕的防治是临床研究的重要方向,但直到现在,增生性瘢痕的发生发展机制仍不十分清楚,导致其治疗效果十分有限。研究发现,成纤维细胞是参与创面修复的主要功能细胞之一,它通过分泌过多的细胞外基质（extracellμLar cell matrix,ECM）和过度增殖而在增生性瘢痕发生发展中起着重要作用。TGF-β1是组织纤维化过程中十分关键的因子,大量研究表明TGF-β1及其下游靶分子通过影响细胞增殖、凋亡、分化、自噬和局部免疫反应来影响组织纤维化。在组织修复的早期,增生性瘢痕组织会高表达TGF-β1从而促进真皮成纤维细胞的增殖及迁移,这与瘢痕的产生密切相关。我们课题组前期研究发现,在皮肤真皮成纤维细胞中TGF-β1可以促进P311基因的表达,而P311在组织纤维化、成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化中均发挥重要的作用,除此以外,P311还参与神经再生、肿瘤侵袭、血压稳态维持、血管再生、肺泡发生等重要病理生理学过程。但纤维化过程中P311上游调控机... 

【文章来源】：中国人民解放军陆军军医大学重庆市

【文章页数】：100 页

【学位级别】：硕士

【图文】：

成人包皮原代真皮成纤维细胞中P311基因promoter-1序列的表观学修饰情况

陆军军医大学硕士学位论文29图3.成人包皮原代真皮成纤维细胞中P311基因promoter-2序列的表观学修饰情况2.3.2启动子质粒的构建根据上一部分的数据分析结果，我们认为promoter-1更有可能是P311基因的启动，但是我们需要进一步通过生物学实验来验证这一推测。因此，我们需要构建包含P311启动子片段的pGL3-Basic质粒，利用双荧光素酶和质粒截短的方式进一步验证。因此我们的设计了不同长度大小的启动子片段，通过鉴定含有不同片段的pGL3-Basic质粒的的荧光素酶活性来找出真正的启动子区（图4）。首先我们通过PCR扩增目的片段并进行DNA凝胶电泳对片段大小进行验证，获得了不同片段大小的pGL3-Basic质粒（图5）。图4.P311基因结构示意图

陆军军医大学硕士学位论文29图3.成人包皮原代真皮成纤维细胞中P311基因promoter-2序列的表观学修饰情况2.3.2启动子质粒的构建根据上一部分的数据分析结果，我们认为promoter-1更有可能是P311基因的启动，但是我们需要进一步通过生物学实验来验证这一推测。因此，我们需要构建包含P311启动子片段的pGL3-Basic质粒，利用双荧光素酶和质粒截短的方式进一步验证。因此我们的设计了不同长度大小的启动子片段，通过鉴定含有不同片段的pGL3-Basic质粒的的荧光素酶活性来找出真正的启动子区（图4）。首先我们通过PCR扩增目的片段并进行DNA凝胶电泳对片段大小进行验证，获得了不同片段大小的pGL3-Basic质粒（图5）。图4.P311基因结构示意图


本文编号：3100595