Notch通路在大鼠肌腱干细胞体外成神经分化中的作用与机制研究
发布时间：2021-03-30 13:33
目的:探究大鼠肌腱干细胞（tendon-derived stem cells,TDSCs）体外成神经分化的潜能,并研究Notch通路在此成神经分化过程中的调控作用及其机制。方法:实验组将4周龄SD大鼠的跟腱组织取出,分离并提取肌腱干细胞（tendon-derived stem cells,TDSCs）进行培养,将细胞培养到第3代（P3）后分为对照组和实验组,对照组不做任何处理继续予以普通培养基进行培养,实验组采用诱导分化培养基进行成神经细胞分化的诱导,在诱导相应的时间段后使用定量荧光聚合酶链反应（Real-time PCR）检测神经细胞相关基因GFAP、Neun、β3-tubulin表达变化,找出诱导的合适时间后,进一步使用蛋白质印迹法（Western Blot）和免疫荧光技术检测神经细胞相关基因GFAP、Neun、β3-tubulin表达变化,并检测Notch通路相关基因NICD、Hes-1、RBPJk的表达差异,研究Notch通路在此成神经分化过程中表达的变化,之后进一步对Notch通路进行调控后再检测TDSCs成神经分化的能力变化。实验数据应用t检验验证统计学差异。结果:与对照组...
【文章来源】：东南大学江苏省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
正常TDSCs与神经分化诱导7d之后的细胞形态学观察:（A、B×40）A：正常TDSCsB:TDSCs诱导7d后的TDSCs
讨论13图2.TDSCs分化成神经分化6h，12h，1d，2d，3d，5d，7d，9d时gfap、β3-tubulin与Neun基因RNA的表达差异变化Figure2.6h,12h,1d,2d,3d,5d,7dand9dafterneuraldifferentiation,expressionofgfap,β3-tubulinandNeunRNAinTDSCs2．诱导分化之后的肌腱干细胞高表达神经细胞特异性标记物2.1TDSCs经诱导分化后7d，与正常培养相同天数的肌腱干细胞比较神经细胞相关特异性基因的表达。经诱导分化之后的TDSCs在gfap、β3-tubulin与Neun基因mRNA的表达量升高，差异有统计学意义（图3A）。WB同样检测到上述基因在分化诱导之后的TDSCs中高表达（图3B），并且对目的条带灰度值进行分析，同样具有统计学差异（图3C）。图3.正常TDSCs与TDSCs神经分化诱导7d之后细胞在神经细胞相关性基因gfap、β3-tubulin和Neun的表达差异:（TDSCs：普通肌腱干细胞ND-TDSCs：普通肌腱干细胞经过神经诱导7d后）A:RT-PCR测两组mRNA表达差异;B:WB测两组蛋白表达差异;C:WB目的条带灰度值分析Figure3.Differencesinexpressionofneuronalcellgenesgfap,β3-tubulin,andNeunbetweennormalTDSCsand7dafterneuronaldifferentiation:(TDSCs:normaltendonstemcellsND-TDSCs:normaltendonstemcellsafterneuronaldifferentiationfor7days)A:RT-PCRwasusedtodetectthedifferenceinmRNAexpressionbetweenthetwogroups.B:WBwasusedtomeasurethedifferenceinproteinexpressionbetweenthetwogroups.C:GrayvalueanalysisofWB.
讨论15图4.免疫荧光染色检测正常TDSCs与TDSCs神经分化诱导7d之后细胞在gfap、β3-tubulin和Neun的阳性细胞数量和表达量的差异:（TDSCs：普通肌腱干细胞;ND-TDSCs：普通肌腱干细胞经过神经诱导7d后）Figure4.Immunofluorescencewasusedtomeasurethedifferencesinexpressionofneuronalcellgenesgfap,β3-tubulin,andNeunbetweennormalTDSCsand7dafterneuronaldifferentiation:(TDSCs:normaltendonstemcells.ND-TDSCs:normaltendonstemcellsafterneuronaldifferentiationfor7days)3.Notch通路在肌腱干细胞成神经分化中的表达变化TDSCs经诱导分化后7d，与正常培养相同天数的肌腱干细胞比较神经细胞相关特异性基因的表达。经诱导分化之后的TDSCs在NICD、Hes-1与RBPJk基因mRNA的表达量降低，差异有统计学意义(图5A)。WB同样检测到上述标记物在分化诱导之后的TDSCs中的表达降低（图5B）。并且对目的条带灰度值进行分析，同样具有统计学差异（图5C）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]肌腱干细胞与骨髓间充质干细胞促进髌腱愈合的对比研究[J]. 孔祥朋,倪明,张国强,柴伟,李想,李於聪,王岩. 浙江大学学报(医学版). 2016 (02)
[2]慢性腱病治疗的新策略:调控肌腱干细胞成肌腱分化促进肌腱愈合[J]. 林禹丞,王宸,芮云峰. 中国矫形外科杂志. 2013(21)
[3]Wnt3a signaling promotes proliferation,myogenic differentiation,and migration of rat bone marrow mesenchymal stem cells[J]. Yan-chang SHANG~(2,3),Shu-hui WANG~4,Fu XIONG~5,Cui-ping ZHAO~2,Fu-ning PENG~2,Shan-wei FENG~2,Mei-shan LI~2,YongLI~5,Cheng ZHANG~(2,5,6)~2 Department of Neurology First Affiliated Hospital,Sun Yat-sen University,Guangzhou 510080,China,~3 Department of Geriatric NeurologyChinese People’s Liberation Army General Hospital,Beijing 100853,China;~4 Department of Neurology,Beijing Friendship Hospital,CapitalMedical University,Beijing 100050,China,~5 Center for Stem Cell Biology and Tissue Engineering,Sun Yat-sen University Guangzhou510080.China. Acta Pharmacologica Sinica. 2007(11)
本文编号：3109596
【文章来源】：东南大学江苏省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
正常TDSCs与神经分化诱导7d之后的细胞形态学观察:（A、B×40）A：正常TDSCsB:TDSCs诱导7d后的TDSCs
讨论13图2.TDSCs分化成神经分化6h，12h，1d，2d，3d，5d，7d，9d时gfap、β3-tubulin与Neun基因RNA的表达差异变化Figure2.6h,12h,1d,2d,3d,5d,7dand9dafterneuraldifferentiation,expressionofgfap,β3-tubulinandNeunRNAinTDSCs2．诱导分化之后的肌腱干细胞高表达神经细胞特异性标记物2.1TDSCs经诱导分化后7d，与正常培养相同天数的肌腱干细胞比较神经细胞相关特异性基因的表达。经诱导分化之后的TDSCs在gfap、β3-tubulin与Neun基因mRNA的表达量升高，差异有统计学意义（图3A）。WB同样检测到上述基因在分化诱导之后的TDSCs中高表达（图3B），并且对目的条带灰度值进行分析，同样具有统计学差异（图3C）。图3.正常TDSCs与TDSCs神经分化诱导7d之后细胞在神经细胞相关性基因gfap、β3-tubulin和Neun的表达差异:（TDSCs：普通肌腱干细胞ND-TDSCs：普通肌腱干细胞经过神经诱导7d后）A:RT-PCR测两组mRNA表达差异;B:WB测两组蛋白表达差异;C:WB目的条带灰度值分析Figure3.Differencesinexpressionofneuronalcellgenesgfap,β3-tubulin,andNeunbetweennormalTDSCsand7dafterneuronaldifferentiation:(TDSCs:normaltendonstemcellsND-TDSCs:normaltendonstemcellsafterneuronaldifferentiationfor7days)A:RT-PCRwasusedtodetectthedifferenceinmRNAexpressionbetweenthetwogroups.B:WBwasusedtomeasurethedifferenceinproteinexpressionbetweenthetwogroups.C:GrayvalueanalysisofWB.
讨论15图4.免疫荧光染色检测正常TDSCs与TDSCs神经分化诱导7d之后细胞在gfap、β3-tubulin和Neun的阳性细胞数量和表达量的差异:（TDSCs：普通肌腱干细胞;ND-TDSCs：普通肌腱干细胞经过神经诱导7d后）Figure4.Immunofluorescencewasusedtomeasurethedifferencesinexpressionofneuronalcellgenesgfap,β3-tubulin,andNeunbetweennormalTDSCsand7dafterneuronaldifferentiation:(TDSCs:normaltendonstemcells.ND-TDSCs:normaltendonstemcellsafterneuronaldifferentiationfor7days)3.Notch通路在肌腱干细胞成神经分化中的表达变化TDSCs经诱导分化后7d，与正常培养相同天数的肌腱干细胞比较神经细胞相关特异性基因的表达。经诱导分化之后的TDSCs在NICD、Hes-1与RBPJk基因mRNA的表达量降低，差异有统计学意义(图5A)。WB同样检测到上述标记物在分化诱导之后的TDSCs中的表达降低（图5B）。并且对目的条带灰度值进行分析，同样具有统计学差异（图5C）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]肌腱干细胞与骨髓间充质干细胞促进髌腱愈合的对比研究[J]. 孔祥朋,倪明,张国强,柴伟,李想,李於聪,王岩. 浙江大学学报(医学版). 2016 (02)
[2]慢性腱病治疗的新策略:调控肌腱干细胞成肌腱分化促进肌腱愈合[J]. 林禹丞,王宸,芮云峰. 中国矫形外科杂志. 2013(21)
[3]Wnt3a signaling promotes proliferation,myogenic differentiation,and migration of rat bone marrow mesenchymal stem cells[J]. Yan-chang SHANG~(2,3),Shu-hui WANG~4,Fu XIONG~5,Cui-ping ZHAO~2,Fu-ning PENG~2,Shan-wei FENG~2,Mei-shan LI~2,YongLI~5,Cheng ZHANG~(2,5,6)~2 Department of Neurology First Affiliated Hospital,Sun Yat-sen University,Guangzhou 510080,China,~3 Department of Geriatric NeurologyChinese People’s Liberation Army General Hospital,Beijing 100853,China;~4 Department of Neurology,Beijing Friendship Hospital,CapitalMedical University,Beijing 100050,China,~5 Center for Stem Cell Biology and Tissue Engineering,Sun Yat-sen University Guangzhou510080.China. Acta Pharmacologica Sinica. 2007(11)
本文编号：3109596
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