MicroRNA-146a通过抑制TRAF6/NF-κB通路减轻椎间盘细胞炎症反应

发布时间：2021-04-02 21:36

　　研究背景:椎间盘退变性疾病（Disc Degeneration Disease, DDD）已被公认为腰痛的主要原因。越来越多的研究证明,椎间盘退变与多种促炎细胞因子及其代谢产物有关。近年来,大量研究证明,MicroRNA （miRNA）在包括退行性椎间盘疾病在内的大多数疾病的发生发展中具有重要作用。目前研究表明,椎间盘退变和炎症因子之间存在密切联系,但是在炎性通路的角度上分析两者相关性的研究较少,椎间盘退变和炎症因子之间具体的作用过程也不明确。虽然我们了解两者之间存在相关性,但仍未找到靶基因来减轻椎间盘细胞炎症反应,所以大部分此类研究应用性不强,缺乏实际意义。MicroRNA-146a作为一种短小的非编码RNA,是一种反调控因子,通过对基因表达转录后调节参与许多生物学过程,尤其是在炎症反应中扮演了重要的角色。基于以上研究成果,本研究拟通过体内和体外实验,从分子水平来研究探讨MicroRNA-146a在椎间盘退变疾病中的调控机制,寻找MicroRNA-146a与TRAF6/NF-K B信号通路交互作用功能分子,为脊椎退变性病变寻找新的治疗靶标。本研究提出MicroRNA-146a过表达可... 

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【文章页数】：101 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１三组研究对象的ＮＦ－ｋ?Ｂ、ＴＮＦ－ａ和ＩＬ－１表达水平比较（ｘ?）?（ｍｇ／Ｌ）??

１９?０?２?０?０?２?１０?２２?０?２３０?２?４?０?２５０?：??ＡＣＡＣＣＧＧＣＡＧＧ?／ｖ／ＣＡＣＣＡ?ＡＧ，、ＡＧＴＴ?丁ＣＡＴＣ?丁?ＣＧ?ＡＧｉＶＴＸＳ?Ａ／５ＣＴＴＣ?丁?ＴＧＣＴＴＧｒｒ＾ｒＣＣｒＴＧ?丁丁?ＴＴＴＧＡＡ?丁?ＴＣ：?Ｃ５Ｃ??图１：重组质粒测序结果??将携带增强型绿色焚光蛋白（Ｅｎｈａｎｃｅｄ?Ｇｒｅｅｎ?Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ?Ｐｒｏｔｅｉｎ，?ＥＧＦＰ）告基因的载体ＭｉｃｒｏＲＮＡ－１４６ａｍｉｍｉｃ包装成为载体颗粒，在感染细胞后表达ＥＧＦＰ，??在显微镜下发绿色荧光。然后进行预实验条件筛查显示，在６孔板中每孔的细胞??数为１Ｘ１０５个，细胞融合度在转染时可以达到３０％？５０％，而在感染复数??（ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙ?ｏｆ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，?ＭＯＩ）?＝５０，ｐｏｌｙｂｒｅｎｅ?５ｕｇ／ｍＬ?时有较高感染效??＇

将线性化Ｍｉｃ：ｒｏＲＮＡ－１４６ａ?ｍｉｍｉｃ载体与合成的ＤＮＡ?ｏｌｉｇｏ经过连接转化，然??后将含有ＮＰ－ｓｉＲＮＡ序列的重组质粒抽取出来经过测序，结果显示其完全符合我??们的实验设计要求，如图１。??１９?０?２?０?０?２?１０?２２?０?２３０?２?４?０?２５０?：??ＡＣＡＣＣＧＧＣＡＧＧ?／ｖ／ＣＡＣＣＡ?ＡＧ，、ＡＧＴＴ?丁ＣＡＴＣ?丁?ＣＧ?ＡＧｉＶＴＸＳ?Ａ／５ＣＴＴＣ?丁?ＴＧＣＴＴＧｒｒ＾ｒＣＣｒＴＧ?丁丁?ＴＴＴＧＡＡ?丁?ＴＣ：?Ｃ５Ｃ??图１：重组质粒测序结果??将携带增强型绿色焚光蛋白（Ｅｎｈａｎｃｅｄ?Ｇｒｅｅｎ?Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ?Ｐｒｏｔｅｉｎ，?ＥＧＦＰ）报??告基因的载体ＭｉｃｒｏＲＮＡ－１４６ａｍｉｍｉｃ包装成为载体颗粒，在感染细胞后表达ＥＧＦＰ，??在显微镜下发绿色荧光。然后进行预实验条件筛查显示，在６孔板中每孔的细胞??数为１Ｘ１０５个，细胞融合度在转染时可以达到３０％？５０％，而在感染复数??（ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙ?ｏｆ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，?ＭＯＩ）?＝５０，ｐｏｌｙｂｒｅｎｅ?５ｕｇ／ｍＬ?时有较高感染效??＇Ｉ?ｔ??图２：?ＭｉｃｒｏＲＮＡ－１４６ａ组感染细胞后倒置荧光显微镜图像??４２??

【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
[1]miR-146a通过TRAF6调控中枢内源性IFN-β参与实验性自身免疫性脑脊髓炎病程发生发展的机制研究[D]. 王戬萌.吉林大学 2016



本文编号：3116002