MiR-145靶向FRS2加速自噬保护软骨细胞抗氧化应激的机制研究

发布时间：2021-04-07 15:26

　　目的:骨关节炎（Osteoarthritis,OA）是最常见的慢性和进行性关节疾病,以软骨变性和软骨细胞死亡为主要特征。OA的发病机制非常复杂,迄今为止尚无有效的治疗方法。研究发现,OA患者的软骨组织中miR-145表达水平的显著下调,人软骨细胞C20A4中的miR-145表达与自噬活性呈相关性。本实验通过收集原发性膝关节骨性关节炎患者关节软骨标本及膝关节滑液,利用细胞培养技术、定量聚合酶链反应技术、病毒转染技术、免疫印迹技术、荧光素酶测定技术,检测关节软骨中的miR-145动态表达及其对自噬的调节作用。方法:收集40例原发性膝关节骨关节炎患者的关节软骨和关节液标本,进行软骨细胞的原代培养,通过病毒转染技术、定量聚合酶链反应技术、免疫印迹技术、细胞活力检测技术研究miR-145、自噬活性标志物LC3-I、LC3-II、p62的表达与关节软骨细胞自噬活性之间的关系。研究调节miR-145表达对氧化应激状态下自噬和软骨细胞活力的影响,探索OA中的miR-145动态表达及其对自噬的调节作用。结果:1.骨关节炎患者的关节软骨、关节液和原代软骨细胞中的miR-145与正常对照组相比,OA组的mi... 

【文章来源】：济宁医学院山东省

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

miR-145表达在OA软骨（A）、关节滑液（B）和原代软骨细胞（C）与正常对照组的比较

MiR-145正性调节软骨细胞的自噬活性

济宁医学院硕士专业学位论文26图3MiR-145通过促进自噬提高氧化应激状态下软骨细胞的生存能力。在氧化应激状态下，miR-145过表达增强了软骨细胞的生存能力，与雷帕霉素刺激自噬的作用程度相似。抑制miR-145后，与自噬抑制剂3MA处理相比，软骨细胞的活力显著下降。在3MA抑制自噬和miR-145过表达或雷帕霉素刺激自噬和miR-145抑制的联合作用下，软骨细胞活力与未处理对照组保持相同水平，表明miR-145对自噬有正向调节作用，从而提高软骨细胞抗氧化应激的能力。数据均值±标准误(n=3)*p<0.05,**p<0.01,***p<0.0014MiR-145直接靶向FRS2的3′UTR通过生物信息学软件（www.targetscan.org），预测miR-145靶向成纤维细胞生长因子受体底物2（FRS2），推定其种子序列位于3′UTR中（图4A）。当软骨细胞中miR-145和FRS23′UTR载体共转染时，荧光素酶测定显示荧光素酶活性显著降低。相比之下，FRS23′UTR中的miR-145结合位点序列发生突变时，共转染的miR-145不会影响荧光素酶活性，这表明miR-145与种子序列直接结合并靶向作用于FRS23′UTR（图4B）。此外，与正常对照组相比，OA患者的关节软骨和OA软骨细胞显示FRS2表达上调，这与其上游调控物miR-145

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3123740