CXCL12/CXCR4/MMP-2信号通路对三阴型乳腺癌生物学行为的影响
发布时间：2021-04-15 23:04
目的探讨CXCL12/CXCR4/MMP-2信号通路对三阴型乳腺癌增殖和迁移等生物学行为的影响。方法通过脂质体介导的瞬时转染CXCR4-siRNA和pc DNA3.1-CXCR4,提取MDA-MB-231细胞中RNA和蛋白质,分别用RT-PCR和Western blot法检测各组细胞中CXCR4、CXCL12及MMP-2的mRNA和蛋白质的表达变化,应用MTT实验和划痕实验检测转染后肿瘤细胞的增殖和迁移能力的改变。结果转染CXCR4-siRNA后实验组细胞中CXCR4 mRNA及蛋白表达减少（P<0.01）,CXCL12mRNA及蛋白表达增加（P<0.01）,MMP-2 mRNA及蛋白表达减少（P<0.01）;MTT实验和划痕实验结果显示转染后72 h细胞的增殖能力下降,划痕愈合迟缓;转染pc DNA3.1-CXCR4后实验组细胞中CXCR4 mRNA及蛋白表达上调（P<0.01）,CXCL12 mRNA及蛋白表达降低（P<0.01）,MMP-2 mRNA及蛋白表达增加（P<0.01）,MTT实验和划痕实验结果显示转染后72h细胞的增殖能力增加,划痕...
【文章来源】：临床与实验病理学杂志. 2017,33(11)北大核心CSCD
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
ＲT-PCＲ检测各组MDA-MB-231细胞中CXCＲ4mＲNA水平表达A．转染CXCＲ4-siＲNA组;B．转染pcDNA3.1-CXCＲ4组;＊＊P＜0.01
图1Westernblot检测CXCＲ4-siＲNA(A)和pcDNA3.1-CXCＲ4(B)转染MDA-MB-231细胞后CXCＲ4、CXCL12及MMP-2蛋白的表达及MMP-2mＲNA的相对表达量。结果显示:转染CXCＲ4-siＲNA后CXCＲ4的mＲNA表达量显著低于空白对照组和阴性对照组(P＜0.01)，CXCL12的mＲNA表达量显著高于空白对照组和阴性对照组(P＜0.01)，MMP-2的mＲNA表达量显著低于空白对照组和阴性对照组(P＜0.01);转染pcDNA3.1-CXCＲ4后CXCＲ4的mＲNA表达量显著高于空白对照组和阴性对照组(P＜0.01)，CXCL12的mＲNA表达量显著低于空白对照组和阴性对照组(P＜0.01)，MMP-2的mＲNA表达量显著高于空白对照组和阴性对照组(P＜0.01，图2～4)。2．3划痕实验检测分别转染CXCＲ4-siＲNA和pcDNA3.1-CXCＲ4后MDA-MB-231细胞迁移能力的变化沿6孔板的直径均匀用力划痕后，转染CXCＲ4-siＲNA和pcDNA3.1-CXCＲ4，检测干扰CX-CＲ4基因的表达对MDA-MB-231细胞迁移能力的影响。从倒置显微镜中细胞划痕的图像可见，在转染CXCＲ4-siＲNA72h后与空白对照组和阴性对照组相比，实验组细胞间距宽于对照组，愈合距离比大于对照组，且差异有统计学意义(P＜0.01)，提示转染CXCＲ4-siＲNA后细胞的迁移能力下降，划痕愈合迟缓，下调CXCＲ4基因的表达可抑制肿瘤细胞的迁移;在转染pcDNA3.1-CXCＲ472h后与空白对照组和阴性对照组相比，实验组细胞间距窄于对照图2ＲT-PCＲ检测各组MDA-MB-231细胞中CXCＲ4mＲNA水平表达A．转染CXCＲ4-siＲNA组;B．转染pcDNA3.1-CXCＲ4组;＊＊P＜0.01图3ＲT-PCＲ检测各组MDA-MB-231细胞中CXCL12mＲNA水平表达A．转染CXCＲ4-siＲNA组;B．转染pcDNA3.1-CXCＲ4组;＊＊P＜0.01临床与实验病理学杂志JClinExpPathol2017Nov;33(11)·1205·
组，愈合距离比小于对照组，且差异有统计学意义(P＜0.01，图5)，提示转染pcDNA3.1-CXCＲ4后细胞的迁移能力增强，划痕愈合加快，上调CXCＲ4基因的表达可促进肿瘤细胞的迁移。图4ＲT-PCＲ检测各组MDA-MB-231细胞中MMP-2mＲNA水平表A．转染CXCＲ4-siＲNA组;B．转染pcDNA3.1-CXCＲ4组;＊＊P＜0.01图5细胞划痕实验检测CXCＲ4-siＲNA和pcDNA3.1-CXCＲ4转染MDA-MB-231后细胞迁移能力变化2．4MTT实验检测分别转染CXCＲ4-siＲNA和pcDNA3.1-CXCＲ4后MDA-MB-231细胞增殖能力的变化应用MTT法检测各组细胞的增殖能力，结果显示:CXCＲ4-siＲNA转染MDA-MB-231细胞48、72、96h后，实验组细胞增殖能力较阴性对照组和空白对照组降低，其中以72h降低最为显著，差异有统计学意义(P＜0.05);阴性对照组和空白对照组相比，差异无统计学意义(P＞0.05)，提示下调CXCＲ4的表达能够显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖能力。pcDNA3.1-CXCＲ4转染MDA-MB-231细胞48、72、96h后，实验组细胞增殖能力与阴性对照组和空白对照组相比显著增加，其中以72h降低最为显著，差异有统计学意义(P＜0.05);阴性对照组与空白对照组相比，差异无统计学意义(P＞0.05，图6)。提示下调CXCＲ4的表达能够显著促进MDA-MB-231细胞的增殖能力。图6MTT实验检测转染CXCＲ4-siＲNA和pcDNA3.1-CXCＲ4后细胞增殖能力的变化3讨论乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，WHO(2014)乳腺肿瘤分类的统计数据显示乳腺癌占女性肿瘤的16%，每年约50万以上的患者死亡。其中三阴型乳腺癌占浸润性乳腺癌的15%～20%，具有侵袭性强、病理分级高和广泛的淋巴结转移，且在年轻患者中更为常见［3］。与其他亚型的乳腺癌相比，三阴型乳腺癌患者在治疗2～3年后发生远处转移和早期复发的可能性较高，患者
本文编号：3140258
【文章来源】：临床与实验病理学杂志. 2017,33(11)北大核心CSCD
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
ＲT-PCＲ检测各组MDA-MB-231细胞中CXCＲ4mＲNA水平表达A．转染CXCＲ4-siＲNA组;B．转染pcDNA3.1-CXCＲ4组;＊＊P＜0.01
图1Westernblot检测CXCＲ4-siＲNA(A)和pcDNA3.1-CXCＲ4(B)转染MDA-MB-231细胞后CXCＲ4、CXCL12及MMP-2蛋白的表达及MMP-2mＲNA的相对表达量。结果显示:转染CXCＲ4-siＲNA后CXCＲ4的mＲNA表达量显著低于空白对照组和阴性对照组(P＜0.01)，CXCL12的mＲNA表达量显著高于空白对照组和阴性对照组(P＜0.01)，MMP-2的mＲNA表达量显著低于空白对照组和阴性对照组(P＜0.01);转染pcDNA3.1-CXCＲ4后CXCＲ4的mＲNA表达量显著高于空白对照组和阴性对照组(P＜0.01)，CXCL12的mＲNA表达量显著低于空白对照组和阴性对照组(P＜0.01)，MMP-2的mＲNA表达量显著高于空白对照组和阴性对照组(P＜0.01，图2～4)。2．3划痕实验检测分别转染CXCＲ4-siＲNA和pcDNA3.1-CXCＲ4后MDA-MB-231细胞迁移能力的变化沿6孔板的直径均匀用力划痕后，转染CXCＲ4-siＲNA和pcDNA3.1-CXCＲ4，检测干扰CX-CＲ4基因的表达对MDA-MB-231细胞迁移能力的影响。从倒置显微镜中细胞划痕的图像可见，在转染CXCＲ4-siＲNA72h后与空白对照组和阴性对照组相比，实验组细胞间距宽于对照组，愈合距离比大于对照组，且差异有统计学意义(P＜0.01)，提示转染CXCＲ4-siＲNA后细胞的迁移能力下降，划痕愈合迟缓，下调CXCＲ4基因的表达可抑制肿瘤细胞的迁移;在转染pcDNA3.1-CXCＲ472h后与空白对照组和阴性对照组相比，实验组细胞间距窄于对照图2ＲT-PCＲ检测各组MDA-MB-231细胞中CXCＲ4mＲNA水平表达A．转染CXCＲ4-siＲNA组;B．转染pcDNA3.1-CXCＲ4组;＊＊P＜0.01图3ＲT-PCＲ检测各组MDA-MB-231细胞中CXCL12mＲNA水平表达A．转染CXCＲ4-siＲNA组;B．转染pcDNA3.1-CXCＲ4组;＊＊P＜0.01临床与实验病理学杂志JClinExpPathol2017Nov;33(11)·1205·
组，愈合距离比小于对照组，且差异有统计学意义(P＜0.01，图5)，提示转染pcDNA3.1-CXCＲ4后细胞的迁移能力增强，划痕愈合加快，上调CXCＲ4基因的表达可促进肿瘤细胞的迁移。图4ＲT-PCＲ检测各组MDA-MB-231细胞中MMP-2mＲNA水平表A．转染CXCＲ4-siＲNA组;B．转染pcDNA3.1-CXCＲ4组;＊＊P＜0.01图5细胞划痕实验检测CXCＲ4-siＲNA和pcDNA3.1-CXCＲ4转染MDA-MB-231后细胞迁移能力变化2．4MTT实验检测分别转染CXCＲ4-siＲNA和pcDNA3.1-CXCＲ4后MDA-MB-231细胞增殖能力的变化应用MTT法检测各组细胞的增殖能力，结果显示:CXCＲ4-siＲNA转染MDA-MB-231细胞48、72、96h后，实验组细胞增殖能力较阴性对照组和空白对照组降低，其中以72h降低最为显著，差异有统计学意义(P＜0.05);阴性对照组和空白对照组相比，差异无统计学意义(P＞0.05)，提示下调CXCＲ4的表达能够显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖能力。pcDNA3.1-CXCＲ4转染MDA-MB-231细胞48、72、96h后，实验组细胞增殖能力与阴性对照组和空白对照组相比显著增加，其中以72h降低最为显著，差异有统计学意义(P＜0.05);阴性对照组与空白对照组相比，差异无统计学意义(P＞0.05，图6)。提示下调CXCＲ4的表达能够显著促进MDA-MB-231细胞的增殖能力。图6MTT实验检测转染CXCＲ4-siＲNA和pcDNA3.1-CXCＲ4后细胞增殖能力的变化3讨论乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，WHO(2014)乳腺肿瘤分类的统计数据显示乳腺癌占女性肿瘤的16%，每年约50万以上的患者死亡。其中三阴型乳腺癌占浸润性乳腺癌的15%～20%，具有侵袭性强、病理分级高和广泛的淋巴结转移，且在年轻患者中更为常见［3］。与其他亚型的乳腺癌相比，三阴型乳腺癌患者在治疗2～3年后发生远处转移和早期复发的可能性较高，患者
本文编号：3140258
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/waikelunwen/3140258.html
最近更新
教材专著
