Asporin介导TGF-β1/Smad2/3信号通路促进骨关节炎的机制研究
发布时间：2021-04-18 02:52
一、研究背景骨关节炎（Osteoarthritis，OA）是最常见的关节疾病,主要发生在膝关节,临床表现为膝关节疼痛、肿胀、僵硬和运动功能障碍。OA一直是研究的热点,但其发病机制仍不明确,目前大量研究发现构成细胞外基质蛋白重要组成部分的SLRP家族中的asporin可能与OA的发病有关,但其具体作用机制目前还不清楚。二、研究目的本研究首先明确asporin在OA关节软骨细胞中表达情况,并进一步明确软骨细胞asporin表达对OA病理改变的影响,最后明确OA病程中,关节软骨细胞asporin与TGF-β/Smad信号通路的关系,深入探讨软骨细胞asporin在骨关节炎病程中的作用及其分子机制,为防治骨关节炎提供新的潜在靶点。三、研究方法1、收集临床上OA患者关节软骨标本和因严重外伤需要截肢的正常膝关节软骨标本通过免疫组织化学方法（IHC）检测asporin在节软骨中的表达水平;同时收集骨关节炎患者与正常人血清标本,通过酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清中asporin表达情况;利用C57/BL6小鼠构建DMM骨关节炎模型,通过IHC检测asporin在OA发生后4周以及8周后关节软骨...
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－２小鼠骨关节炎模型造模后，关节软骨中ａｓｐｏｒｉｎ表达升高
有抑制ａｓｐｏｒｉｎ蛋白表达的作用，同样是ｓｉ－ＲＮＡ４７９序列效果最为明显，细胞基??质主要成分Ｃ０ＬＬ２与Ａｇｇｒｅｃａｎ的表达上调，而ＭＭＰ－１３、ＡＤＡＭＴＳ－５表达与??对照组相比表达下调（图３－２，ｆ）。??外源性ａｓｐｏｒｉｎ是否对软骨细胞外基质的合成和代谢有关，我们同样利用软??骨细胞，通过具有活性的外源性ａｓｐｏｒｉｎ重组蛋白刺激软骨细胞，检测ＣＯＬＬ２、??Ａｇｇｒｅｃａｎ、ＭＭＰ－１３、ＡＤＡＭＴＳ－５的表达。实验结果显示，重组蛋白ａｓｐｏｒｍ可??明显抑制ＣＯＬＬ２、Ａｇｇｒｅｃａｎ的表达，促进ＭＭＰ－１３、ＡＤＡＭＴＳ－５的合成（图３－２，ｇ），??从而进一步证实了?ａｓｐｏｒｉｎ的表达对于调节软骨细胞外基质的合成与代谢具有重??要作用。??｜，〇．?＾?＝＝?＾??ｓ．Ｒ－１０６３??？！?■?ｄ??ｉＭ１８?Ｔ?［ＩＦ?’??：■：；?丁?ｉＭｉ?ｍ??图３－ｌ?ａｓｐｏｒｉｎ影响软骨细胞外基质代谢。（ａ－ｅ）利用ｓｉ－ＲＮＡ干扰ａｓｐｏｒｉｎ表达后ａｓｐｏｒｉｎ、??二型胶原、聚蛋白多糖、金属蛋白酶１３、聚蛋白多糖酶５?ＲＴ－ｑＰＣＲ结果（＊Ｐ?＜０．５，?＜??０．０１，＊＊＊Ｐ＜?０．００１，?０．０００１）??Ｆｉｇｕｒｅ?３－１?Ｕｓｉｎｇ?ｓｉ－ＲＮＡ?ｔｏ?ｉｎｔｅｒｆｅｒｅ?ｗｉｔｈ?ａｓｐｏｒｉｎ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ：?（ａ－ｅ）?Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ??ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ?ＰＣＲ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｔｙｐｅ?ＩＩ?ｃｏｌｌａｇｅｎ
有抑制ａｓｐｏｒｉｎ蛋白表达的作用，同样是ｓｉ－ＲＮＡ４７９序列效果最为明显，细胞基??质主要成分Ｃ０ＬＬ２与Ａｇｇｒｅｃａｎ的表达上调，而ＭＭＰ－１３、ＡＤＡＭＴＳ－５表达与??对照组相比表达下调（图３－２，ｆ）。??外源性ａｓｐｏｒｉｎ是否对软骨细胞外基质的合成和代谢有关，我们同样利用软??骨细胞，通过具有活性的外源性ａｓｐｏｒｉｎ重组蛋白刺激软骨细胞，检测ＣＯＬＬ２、??Ａｇｇｒｅｃａｎ、ＭＭＰ－１３、ＡＤＡＭＴＳ－５的表达。实验结果显示，重组蛋白ａｓｐｏｒｍ可??明显抑制ＣＯＬＬ２、Ａｇｇｒｅｃａｎ的表达，促进ＭＭＰ－１３、ＡＤＡＭＴＳ－５的合成（图３－２，ｇ），??从而进一步证实了?ａｓｐｏｒｉｎ的表达对于调节软骨细胞外基质的合成与代谢具有重??要作用。??｜，〇．?＾?＝＝?＾??ｓ．Ｒ－１０６３??？！?■?ｄ??ｉＭ１８?Ｔ?［ＩＦ?’??：■：；?丁?ｉＭｉ?ｍ??图３－ｌ?ａｓｐｏｒｉｎ影响软骨细胞外基质代谢。（ａ－ｅ）利用ｓｉ－ＲＮＡ干扰ａｓｐｏｒｉｎ表达后ａｓｐｏｒｉｎ、??二型胶原、聚蛋白多糖、金属蛋白酶１３、聚蛋白多糖酶５?ＲＴ－ｑＰＣＲ结果（＊Ｐ?＜０．５，?＜??０．０１，＊＊＊Ｐ＜?０．００１，?０．０００１）??Ｆｉｇｕｒｅ?３－１?Ｕｓｉｎｇ?ｓｉ－ＲＮＡ?ｔｏ?ｉｎｔｅｒｆｅｒｅ?ｗｉｔｈ?ａｓｐｏｒｉｎ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ：?（ａ－ｅ）?Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ??ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ?ＰＣＲ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｔｙｐｅ?ＩＩ?ｃｏｌｌａｇｅｎ
【参考文献】：
期刊论文
[1]Activation of mTORC1 in subchondral bone preosteoblasts promotes osteoarthritis by stimulating bone sclerosis and secretion of CXCL12[J]. Chuangxin Lin,Liangliang Liu,Chun Zeng,Zhong-Kai Cui,Yuhui Chen,Pinling Lai,Hong Wang,Yan Shao,Haiyan Zhang,Rongkai Zhang,Chang Zhao,Hang Fang,Daozhang Cai,Xiaochun Bai. Bone Research. 2019(01)
[2]骨关节炎流行病学研究[J]. 刘康妍,郑聪,胡海澜. 中华关节外科杂志(电子版). 2017(03)
[3]骨关节炎与Asporin基因多态性关联性的Meta分析[J]. 蒋小红,肖增明,蒋俊俊,李世德. 中国组织工程研究与临床康复. 2011(04)
[4]膝骨性关节炎与asporin基因多态性关系[J]. 邵振兴,秦江辉,戴进,徐勇,易龙,史冬泉,蒋青. 中国公共卫生. 2008(05)
硕士论文
[1]炎性因子对人牙周细胞表达Asporin影响的实验研究[D]. 胡娇.南方医科大学 2014
本文编号：3144654
【文章来源】：南方医科大学广东省
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－２小鼠骨关节炎模型造模后，关节软骨中ａｓｐｏｒｉｎ表达升高
有抑制ａｓｐｏｒｉｎ蛋白表达的作用，同样是ｓｉ－ＲＮＡ４７９序列效果最为明显，细胞基??质主要成分Ｃ０ＬＬ２与Ａｇｇｒｅｃａｎ的表达上调，而ＭＭＰ－１３、ＡＤＡＭＴＳ－５表达与??对照组相比表达下调（图３－２，ｆ）。??外源性ａｓｐｏｒｉｎ是否对软骨细胞外基质的合成和代谢有关，我们同样利用软??骨细胞，通过具有活性的外源性ａｓｐｏｒｉｎ重组蛋白刺激软骨细胞，检测ＣＯＬＬ２、??Ａｇｇｒｅｃａｎ、ＭＭＰ－１３、ＡＤＡＭＴＳ－５的表达。实验结果显示，重组蛋白ａｓｐｏｒｍ可??明显抑制ＣＯＬＬ２、Ａｇｇｒｅｃａｎ的表达，促进ＭＭＰ－１３、ＡＤＡＭＴＳ－５的合成（图３－２，ｇ），??从而进一步证实了?ａｓｐｏｒｉｎ的表达对于调节软骨细胞外基质的合成与代谢具有重??要作用。??｜，〇．?＾?＝＝?＾??ｓ．Ｒ－１０６３??？！?■?ｄ??ｉＭ１８?Ｔ?［ＩＦ?’??：■：；?丁?ｉＭｉ?ｍ??图３－ｌ?ａｓｐｏｒｉｎ影响软骨细胞外基质代谢。（ａ－ｅ）利用ｓｉ－ＲＮＡ干扰ａｓｐｏｒｉｎ表达后ａｓｐｏｒｉｎ、??二型胶原、聚蛋白多糖、金属蛋白酶１３、聚蛋白多糖酶５?ＲＴ－ｑＰＣＲ结果（＊Ｐ?＜０．５，?＜??０．０１，＊＊＊Ｐ＜?０．００１，?０．０００１）??Ｆｉｇｕｒｅ?３－１?Ｕｓｉｎｇ?ｓｉ－ＲＮＡ?ｔｏ?ｉｎｔｅｒｆｅｒｅ?ｗｉｔｈ?ａｓｐｏｒｉｎ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ：?（ａ－ｅ）?Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ??ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ?ＰＣＲ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｔｙｐｅ?ＩＩ?ｃｏｌｌａｇｅｎ
有抑制ａｓｐｏｒｉｎ蛋白表达的作用，同样是ｓｉ－ＲＮＡ４７９序列效果最为明显，细胞基??质主要成分Ｃ０ＬＬ２与Ａｇｇｒｅｃａｎ的表达上调，而ＭＭＰ－１３、ＡＤＡＭＴＳ－５表达与??对照组相比表达下调（图３－２，ｆ）。??外源性ａｓｐｏｒｉｎ是否对软骨细胞外基质的合成和代谢有关，我们同样利用软??骨细胞，通过具有活性的外源性ａｓｐｏｒｉｎ重组蛋白刺激软骨细胞，检测ＣＯＬＬ２、??Ａｇｇｒｅｃａｎ、ＭＭＰ－１３、ＡＤＡＭＴＳ－５的表达。实验结果显示，重组蛋白ａｓｐｏｒｍ可??明显抑制ＣＯＬＬ２、Ａｇｇｒｅｃａｎ的表达，促进ＭＭＰ－１３、ＡＤＡＭＴＳ－５的合成（图３－２，ｇ），??从而进一步证实了?ａｓｐｏｒｉｎ的表达对于调节软骨细胞外基质的合成与代谢具有重??要作用。??｜，〇．?＾?＝＝?＾??ｓ．Ｒ－１０６３??？！?■?ｄ??ｉＭ１８?Ｔ?［ＩＦ?’??：■：；?丁?ｉＭｉ?ｍ??图３－ｌ?ａｓｐｏｒｉｎ影响软骨细胞外基质代谢。（ａ－ｅ）利用ｓｉ－ＲＮＡ干扰ａｓｐｏｒｉｎ表达后ａｓｐｏｒｉｎ、??二型胶原、聚蛋白多糖、金属蛋白酶１３、聚蛋白多糖酶５?ＲＴ－ｑＰＣＲ结果（＊Ｐ?＜０．５，?＜??０．０１，＊＊＊Ｐ＜?０．００１，?０．０００１）??Ｆｉｇｕｒｅ?３－１?Ｕｓｉｎｇ?ｓｉ－ＲＮＡ?ｔｏ?ｉｎｔｅｒｆｅｒｅ?ｗｉｔｈ?ａｓｐｏｒｉｎ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ：?（ａ－ｅ）?Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ??ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ?ＰＣＲ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｔｙｐｅ?ＩＩ?ｃｏｌｌａｇｅｎ
【参考文献】：
期刊论文
[1]Activation of mTORC1 in subchondral bone preosteoblasts promotes osteoarthritis by stimulating bone sclerosis and secretion of CXCL12[J]. Chuangxin Lin,Liangliang Liu,Chun Zeng,Zhong-Kai Cui,Yuhui Chen,Pinling Lai,Hong Wang,Yan Shao,Haiyan Zhang,Rongkai Zhang,Chang Zhao,Hang Fang,Daozhang Cai,Xiaochun Bai. Bone Research. 2019(01)
[2]骨关节炎流行病学研究[J]. 刘康妍,郑聪,胡海澜. 中华关节外科杂志(电子版). 2017(03)
[3]骨关节炎与Asporin基因多态性关联性的Meta分析[J]. 蒋小红,肖增明,蒋俊俊,李世德. 中国组织工程研究与临床康复. 2011(04)
[4]膝骨性关节炎与asporin基因多态性关系[J]. 邵振兴,秦江辉,戴进,徐勇,易龙,史冬泉,蒋青. 中国公共卫生. 2008(05)
硕士论文
[1]炎性因子对人牙周细胞表达Asporin影响的实验研究[D]. 胡娇.南方医科大学 2014
本文编号：3144654
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/waikelunwen/3144654.html
最近更新
教材专著
