氢气对大鼠海马神经元OGD/R损伤线粒体功能稳态及线粒体自噬的影响

发布时间：2021-04-25 09:11

　　目的:研究氢气对氧糖剥夺/再灌注损伤的原代培养大鼠海马神经元细胞线粒体功能稳态及线粒体自噬的影响。方法:将培养至第七天左右稳定成熟的原代海马神经细胞分为:1.对照组（Control组,正常环境下培养）;2.氧糖剥夺/再灌注组（OGD/R组,放入缺氧缺糖环境中2h后再灌注阶段放入正常环境中继续24h）;3.氧糖剥夺+氢气组（OGD/R+H2组,氧糖剥夺2h后再灌注阶段放入富氢培养箱中继续培养24h）;4.氧糖剥夺+雷帕霉素组（OGD/R+RAP组,氧糖剥夺2h后再灌注阶段培养基中加入雷帕霉素使其浓度达到200 nmol/L,正常环境下继续培养24h）;5.氧糖剥夺+3-甲基腺嘌呤组（OGD/R+3-MA组,氧糖剥夺2h后再灌注阶段培养基中加入3-甲基腺嘌呤使其浓度达到10 mmol/L,正常环境下继续培养24h）;6.氧糖剥夺+雷帕霉素+3甲基腺嘌呤组（OGD/R+RAP+3-MA组,氧糖剥夺2h后再灌注阶段培养基中加入雷帕霉素和3甲基腺嘌呤使其浓度分别达到200 nmol/L和10 mmol/L,正常环境下继续培养24h）;7.氧糖剥夺+氢气+3甲基腺嘌呤组（OGD/R+H2+3-MA... 

【文章来源】：桂林医学院广西壮族自治区

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
ABSTRACT
英汉缩略词对照表
前言
1 材料与方法
    1.1 实验材料与试剂
    1.2 主要实验仪器
    1.3 实验方法
        1.3.1 原代大鼠海马神经元培养
        1.3.2 氧糖剥夺/再灌注（OGD/R）模型的建立
        1.3.3 实验设计与分组
        1.3.4 MTT法检测神经细胞存活率
        1.3.5 流式细胞技术检测神经细胞凋亡
        1.3.6 DCFH荧光染色检测细胞内活性氧水平
        1.3.7 JC-10染色测定线粒体膜电位水平
        1.3.8 质粒的构建与神经细胞的转染
        1.3.9 免疫荧光检测线粒体自噬水平
        1.3.10 RT-PCR检测线粒体自噬相关基因PINK1、Parkin和LC3的变化
        1.3.11 Western Blot法检测线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin和LC3的表达
        1.3.12 统计学分析
2 结果
    2.1 氢气提高OGD/R损伤后神经元的存活率
    2.2 氢气降低OGD/R损伤后神经细胞的凋亡水平
    2.3 氢气降低OGD/R后神经细胞的活性氧水平
    2.4 氢气抑制OGD/R损伤后神经元线粒体膜电位的下降
    2.5 氢气上调OGD/R损伤后神经元线粒体自噬水平
    2.6 氢气上调线粒体自噬相关基因的表达
    2.7 氢气上调线粒体自噬相关蛋白的表达
3 讨论
4 结论
5 研究不足之处
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间发表的学术论文目录
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]论细胞色素C、细胞凋亡诱导因子与细胞凋亡的关系[J]. 鲁翠芳,李世英.  求医问药(下半月). 2013(11)
[2]氢气饱和生理盐水对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能缺损、神经细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响[J]. 刘漪,李雪梅,谭永星.  临床神经病学杂志. 2013(05)



本文编号：3159120