应用神经肽Y构建组织工程骨的体内外研究

发布时间：2021-05-15 07:18

　　目的由各种原因导致的骨缺损问题是目前临床上的一个难题,但现有的解决方法弊端很多。神经肽Y可以促进干细胞向成骨细胞分化,本实验通过神经肽Y与人脐带间充质干细胞的作用来明确神经肽Y对人脐带间充质干细胞成骨分化的影响,并尝试构建新型的骨组织工程修复材料。方法本实验分为两部分,体内实验和体外实验。在体外实验中,以人脐带间充质干细胞为实验细胞,神经肽Y作为成骨诱导因子,在培养过程中通过分组观察碱性磷酸酶对成骨细胞的染色、茜素红对钙结节的染色、PCR技术对成骨相关基因的检测分析以及Western Blot技术对成骨相关蛋白的检测来观察神经肽Y是否可以促进人脐带间充质干细胞向成骨细胞分化。在体内实验中,制备神经肽Y/I型胶原/β-TCP复合体,再选用SD大鼠为实验动物构建大鼠颅骨缺损模型,将制备成功的神经肽Y/I型胶原/β-TCP复合体通过外科手术的方式植入到大鼠颅骨缺损模型中。SPF动物房继续饲养,并于第30天用颈椎脱臼法处死大鼠,获取完整的颅骨标本。将标本进行Micro-CT扫描,观察神经肽Y/I型胶原/β-TCP复合体对大鼠颅骨缺损的修复作用。结果通过碱性磷酸酶染色、茜素红染色、PCR及Wes... 

【文章来源】：深圳大学广东省

【文章页数】：50 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
绪言
第一章 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 实验细胞系
        2.1.2 实验药物及试剂
        2.1.3 实验动物
        2.1.4 主要仪器设备
        2.1.5 主要培基及药物配制
    2.2 方法
        2.2.1 体外实验方法
            2.2.1.1 人脐带血间充质干细胞复苏与培养
            2.2.1.2 诱导干细胞向成骨细胞分化
            2.2.1.3 碱性磷酸酶染色
            2.2.1.4 茜素红染色
            2.2.1.5 qRT-PCR定量实验
            2.2.1.6 Western-blot检测蛋白的表达
        2.2.2 体内实验方法
            2.2.2.1 物品准备及术前大鼠处理
            2.2.2.2 大鼠称重、麻醉
            2.2.2.3 大鼠手术及术后管理方法
            2.2.2.4 大鼠处死获取标本及标本检测
        2.2.3 实验数据分析
第二章 实验结果
    3.1 体外实验
        3.1.1 神经肽Y可以提高人脐带间充质干细胞诱导为成骨细胞的效率
        3.1.2 神经肽Y可以促进成骨细胞钙结节的形成
        3.1.3 神经肽Y可以增加ALP,OCN,Runx2 以及β -catenin的mRNA表达
        3.1.4 神经肽Y对成骨细胞相关蛋白表达量的影响
    3.2 体内实验
        3.2.1 神经肽Y/I型胶原/β -TCP凝胶的制备
        3.2.2 大鼠头骨缺损模型的构建
        3.2.3 神经肽Y/I型胶原/β -TCP复合体整合至骨损伤处
        3.2.4 NPY可以明显的促进大鼠颅骨损伤模型的修复
第三章 讨论
结论
参考文献
英文缩略词简表
神经营养因子在骨组织形成及骨组织损伤修复中的作用(综述)
    参考文献
致谢
攻读硕士学位期间的研究成果



本文编号：3187209