长链非编码RNA HULC通过下调miR101减轻TNF-α诱导的炎性损伤的机制研究

发布时间：2021-05-15 13:16

　　研究背景:骨关节炎（osteoarthritis,OA）是最常见的关节炎类型。它是一种致残、迟发和退行性疾病,特点是关节软骨和滑膜炎症消失,导致关节僵硬、肿胀、疼痛和活动性丧失。从流行病学的角度来看,目前骨关节炎影响全世界约半数的年龄超过65岁的人群,被认为是首要致残原因之一。尽管人工关节置换能有效地使晚期骨关节炎患者恢复关节功能、提高生活质量,然而在疾病早期由于缺乏特定的症状或体征,很难诊断。因此,迫切需要新的生物标志物用来诊断和治疗早期骨关节炎。骨关节炎最初被认为是一种与炎症无关的磨损性疾病,而如今由于分子生物学的出现,它正被重新定义为一种复杂的、多因素疾病。骨关节炎发生过程中,软骨损伤与炎症基因上调有关,后者可以通过多种信号通路的转导引发软骨损伤。此外,炎症因子还可以导致包括MMP和整合素在内的蛋白酶类表达增加,使关节软骨胞外基质发生降解而加重病情。另外,软骨细胞是关节软骨的重要组成成分,正常情况下软骨细胞的代谢十分活跃,对维持软骨的正常结果和功能有着重要作用。当炎症因子通过MAPK、NF-Kappa B等胞内信号通路的转导传递给转录因子,使软骨细胞分化变为纤维细胞样的表型,促使... 

【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：87 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
符号说明
第一章 引言
    1.1 骨关节炎概述
    1.2 非编码RNA
    1.3 长链非编码RNA HULC
    1.4 MAPK和NF-κB信号通路在骨关节炎中的重要作用
    1.5 研究内容与意义
第二章 实验材料及方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验对象及标本处理
        2.1.2 细胞系
        2.1.3 引物
        2.1.4 表达载体构建
        2.1.5 抗体信息及稀释倍数
        2.1.6 主要实验试剂
        2.1.7 主要实验仪器
        2.1.8 磷酸盐缓冲液PBS配制
        2.1.9 琼脂糖凝胶电泳溶液配制
        2.1.10 TBST溶液配制
        2.1.11 PMSF配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 给药处理
        2.2.3 质粒转染
        2.2.4 实时定量PCR检测
        2.2.5 western blot蛋白表达检测
        2.2.6 CCK-8细胞活力试验
        2.2.7 流式细胞术
        2.2.8 双荧光素酶报告基因实验
        2.2.9 酶联免疫吸附测定
        2.2.10 生物素-亲和素RNA Pull-down实验
        2.2.11 RNA免疫沉淀
        2.2.12 统计学分析
第三章 实验结果
    3.1 骨关节炎患者软骨组织中HULC表达下调
    3.2 TNF-α诱导的ATDC5细胞炎性损伤模型建立
    3.3 HULC能够减轻TNF-α诱导的软骨细胞炎性损伤
    3.4 HULC可以直接与miR-101靶向结合
    3.5 HULC通过调节miR-101的表达减轻TNF-α诱导的ATDC5细胞炎性损伤
    3.6 HULC通过下调miR-101抑制了NF-κB和MAPK信号通路的激活
第四章 讨论
结论
附图、表
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文
学位论文评阅及答辩情况
外文论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]骨关节炎:关节软骨退变的相关研究与进展[J]. 窦晓丽,段晓琴,夏玲,袁望舒,曲福玲,罗媛媛,刘忠良.  中国组织工程研究与临床康复. 2011(20)



本文编号：3187705