七氟醚后处理调节海马区自噬及溶酶体系统在改善缺血缺氧新生大鼠脑损伤预后的机制研究

发布时间：2021-05-26 17:59

　　目的:新生儿缺血缺氧性脑损伤（hypoxic-ischemic brain injury,HIBI）发病率为2.5/1000,相当于全球约400-900万婴儿,是由于子宫内胎儿窘迫、宫内感染、分娩期或分娩后胎儿窒息引起的围产期新生儿脑损伤。HIBI死亡率高,可引起长期神经系统后遗症,如认知障碍,行为障碍或记忆障碍等。目前对于HI引起的认知功能障碍、学习记忆能力降低临床上仍缺乏有效治疗措施。本研究从七氟醚后处理对新生大鼠缺血缺氧脑损伤的保护作用出发,为明确七氟醚后处理对新生大鼠缺血缺氧脑损伤的保护作用机制实现以下实验目的:1、缺血缺氧后24h新生大鼠海马区神经元、小胶质细胞、星形胶质细胞数量变化,各类细胞24h自噬、溶酶体蛋白酶水平变化,及七氟醚后处理对其影响;2、七氟醚调节小胶质细胞溶酶体蛋白酶水平变化,影响海马区神经元死亡率与自噬的关系;3、七氟醚调节小胶质细胞自噬及溶酶体蛋白酶水平变化,改善远期预后与Ezh2/Pten/mTOR关系。明确七氟醚后处理的保护作用机制将为临床改善新生儿缺血缺氧性脑病的预后提供新靶点、新思路。研究方法:1、新生大鼠HIBI模型制备:对7日龄Sprague... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：82 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分:缺血缺氧及七氟醚后处理对新生大鼠海马区各类细胞数量、自噬、溶酶体蛋白酶水平变化的影响
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
        2.2 实验动物分组与模型制备
            2.2.1 实验动物分组
            2.2.2 新生大鼠HIBI模型制备
        2.3 七氟醚后处理
        2.4 各组死亡率及体重
        2.5 脑组织蛋白提取与Western Blot蛋白分析
        2.6 免疫荧光双染
        2.7 统计学分析
    3 结果
        3.1 HI后各组死亡率及体重
        3.2 Western Blot检测分析
        3.3 免疫荧光双染结果
            3.3.1 缺血缺氧后及七氟醚后处理后各类细胞数及自噬水平变化
            3.3.2 缺血缺氧后及七氟醚后处理后溶酶体蛋白酶cathepsinB于海马区表达分布及细胞溶酶体蛋白酶cathepsinB水平变化
    4 讨论
    5 结论
第二部分:七氟醚调节小胶质细胞溶酶体蛋白酶cathepsinB水平变化,影响海马区神经元死亡率与自噬的关系
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
        2.2 新生大鼠脑缺血缺氧模型制备
        2.3 实验动物分组、七氟醚后处理与给药
        2.4 各组死亡率及体重
        2.5 脑组织蛋白提取与Western Blot蛋白分析
        2.6 免疫荧光分析
        2.7 大鼠左右脑质量比
        2.8 脑组织病理组织学检测
        2.9 数据统计分析
    3 结果
        3.1 一般指标
        3.2 Western Blot检测
            3.2.1 在HI处理后24h,七氟醚后处理对HI所致自噬的影响
            3.2.2 在HI处理后24h,七氟醚后处理及自噬激动剂对HI所致溶酶体蛋白酶cathepsinB、炎症因子升高的影响
        3.3 免疫荧光结果分析
            3.3.1 在HI处理后24h,七氟醚后处理对缺血缺氧引起的小胶质自噬水平变化的影响
            3.3.2 在HI处理后24h,七氟醚后处理对缺血缺氧引起的小胶质溶酶体蛋白酶cathepsinB水平变化的影响
        3.4 HI后7 天左右脑质量比
        3.5 Nissl染色检测结果
    4 讨论
    5 结论
第三部分:七氟醚调节小胶质细胞自噬及溶酶体蛋白酶水平变化,改善远期预后与Ezh2表观调控的Pten/Akt/mTOR信号通路关系
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
        2.2 新生大鼠脑缺血缺氧模型制备
        2.3 实验动物分组、七氟醚后处理与给药
        2.4 各组死亡率及体重
        2.5 脑组织蛋白提取与Western Blot蛋白分析
        2.6 免疫荧光分析
        2.7 大鼠左右脑质量比
        2.8 悬吊实验
        2.9 Morris水迷宫实验
        2.10 脑组织病理组织学检测
        2.11 数据统计分析
    3 结果
        3.1 一般指标
        3.2 Western Blot检测
            3.2.1 在HI处理后24h,在新生大鼠HIBI模型中七氟醚后处理对Ezh2 表观调控的Pten/Akt/mTOR通路的影响
            3.2.2 在HI处理后24h,在新生大鼠HIBI模型中七氟醚后处理及GSK126对HI所致自噬及溶酶体蛋白酶cathepsinB的影响
        3.3 免疫荧光结果分析
            3.3.1 在HI后24h,在新生大鼠缺血缺氧及七氟醚后处理后,GSK126 对小胶质自噬水平变化的影响
            3.3.2 在HI后24h,在新生大鼠缺血缺氧及七氟醚后处理及GSK126 对小胶质细胞cathepsinB水平变化的影响
        3.4 HI后7 天左右脑质量比
        3.5 HI后远期行为学测试
            3.5.1 悬吊实验
            3.5.2 Morris水迷宫实验结果
        3.6 Nissl染色检测结果
    4 讨论
    5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：3206808