基因表达谱芯片筛选骨肉瘤MG-63侧群细胞差异基因及候选基因功能验证

发布时间：2021-06-10 14:37

　　目的:流式细胞分选技术分选人骨肉瘤细胞系MG-63细胞中侧群（side population,SP）细胞和非侧群（non-side population,NSP）细胞。人全基因表达谱芯片（Human HT-12 v4 Expression Beadchip）检测两种细胞基因表达差异,分析比较和表达验证后获得候选基因。最后采用基因过表达和沉默技术验证候选基因与肿瘤细胞干性的调控关系,为发现骨肉瘤治疗靶点和临床诊断标记物提供理论依据。方法:1.根据SP细胞具有将荧光染料Hoechst 33342外排而使细胞呈弱荧光信号这一特性,使用流式细胞分选技术分选人骨肉瘤细胞系MG-63细胞中SP和NSP细胞。2.MTT实验、荧光定量PCR验证从MG-63细胞中分选出的SP和NSP细胞的干性。3.提取分选后的SP和NSP细胞RNA,进行人全基因表达谱芯片分析。4.使用GO聚类和KEGG通路富集对差异表达基因进行功能分析。5.荧光定量PCR对筛选出的差异表达最大的前10个基因进行表达验证。6.构建候选差异基因过表达或者沉默的慢病毒质粒。并通过荧光显微镜和流式细胞术评估转染效率。7.CCK-8和平板克隆实... 

【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区

【文章页数】：111 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

激光共聚焦显微镜下观察分选后的细胞荧光强度

总RNA琼脂糖凝胶电泳

标准化SP和NSP后的主成分分析

【参考文献】：
期刊论文
[1]高转移潜能肝癌HCCLM3细胞中侧群细胞的分离及其干细胞特性鉴定[J]. 郭哲,向邦德,姜经航,张俊,钟艳平,苏节,黎乐群.  中国肿瘤生物治疗杂志. 2015(02)
[2]卵巢癌SKOV3细胞中侧群细胞的生物学特性[J]. 钟艳平,孟泳圳,李力,尹富強,黎丹戎,张玮.  肿瘤防治研究. 2014(12)
[3]干细胞标志物在卵巢癌SKOV3细胞侧群细胞中的表达[J]. 钟艳平,孟泳圳,苏节,李力,黎丹戎,张玮.  中国肿瘤生物治疗杂志. 2014(05)
[4]卵巢癌侧群细胞流式分选方法的建立及探讨[J]. 孟泳圳,李力,钟艳平,张玮.  广西医科大学学报. 2013(02)



本文编号：3222559