血清淀粉样蛋白A影响骨代谢的分子机制及与股骨头坏死相关性研究
发布时间：2021-06-23 15:03
血清淀粉样蛋白A是一种急性相蛋白,其在血清中的水平在炎性环境下会上升。在许多疾病中,血清淀粉样蛋白A的水平更是与炎症的进程息息相关。然而,关于血清淀粉样蛋白A和股骨头坏死之间的研究至今仍然是一片空白。本研究通过对股骨头坏死病人进行血清蛋白组学研究,结合对照组分析蛋白差异点发现血清淀粉样蛋白A是一种在股骨头坏死病人血清中明显上升的蛋白。通过对酒精性、激素性和创伤性股骨头坏死各20例病人血清的ELISA分析,结合对照组进一步发现SAA在各种病因的股骨头坏死病人的血清中均有不同程度的升高。体外研究发现,血清淀粉样蛋白A能够明显促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖。进一步研究发现,在大鼠骨髓间充质干细胞诱导分化的过程中加入血清淀粉样蛋白A可以引起p-GSK3β、β-catenin、p-Erk1/2蛋白和ALP、OCN、Runx2、COL-1基因表达的下调,同时引起PPARγ蛋白和aP2、Adipoq、PPARγ基因表达的上调。二者协同作用致使在加入血清淀粉样蛋白A后大鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化被抑制而成脂分化被促进。故我们认为,血清淀粉样蛋白A作为一种重要的急性相炎症蛋白能够影响骨代谢并在股骨头坏死...
【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：83 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
一组典型的双向电泳凝胶对比图，图a是来自11个健康对照的人血清而图b来自11个激素性股骨头坏死患者
上海交通大学博士学位论文-15-ofHomosapiens97.3838766.4140IPI00011264CFHR1ComplementfactorH-relatedprotein1107.3838766.4232IPI00011264CFHR1ComplementfactorH-relatedprotein1117.3838766.4326IPI00011264CFHR1ComplementfactorH-relatedprotein1136.89194170.178IPI00418163C4BcomplementC4-Bpreproprotein145.6471474.7404IPI00019568F2Prothrombin(Fragment)154.8678174.4242IPI00017696C1SComplementC1ssubcomponent176.1345860.8237IPI00641737HPRHaptoglobin186.1345860.8268IPI00641737HPRHaptoglobin196.1345860.8227IPI00641737HPRHaptoglobin206.1338940.5467IPI00478493HPRhaptoglobinisoform2preproprotein216.2813580.5292IPI00552578SAA1;SAA2SerumamyloidAprotein2.3讨论自从股骨头坏死被发现和定义以来，该疾病的潜在分子机制一直是一个谜。尽管磁共振成像对股骨头坏死的早期诊断做出了巨大贡献，但未能及时评估疾病的活动状态和预后导致许许多多患者错失了最佳的治疗时机。现今蛋白质组学技术已被用于分析股骨头坏死患者蛋白水平的变化，从而来探索和发现股骨头坏死的生物标志物[36]。既往的研究已经确定了基质蛋白，血管生成因子与实验动物模型中股骨头坏死发生之间的关系[37,38]。然而，在研究股骨头坏死患者中血清蛋白图1-2对照组、激素性股骨头坏死组、酒精性股骨头坏死组、创伤性股骨头坏死组病人的血清SAA水平。Figure1-2SAAserumlevelofsteroid-induced,alcohol-induced,trauma-inducedONFHpatientsandhealthyvolunteers.
上海交通大学博士学位论文-31-3.1.9统计分析使用IBMSPSSStatistics20软件分析数据，用平均值±标准差（S.D.）表示所有数据。通过单因素方差分析（ANOVA）评估不同组之间的比较。P<0.05被认为具有统计学意义。3.2结果3.2.1血清淀粉样蛋白A促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖为了检验血清淀粉样蛋白A对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响，我们进行了CCK-8实验，在1天、3天和7天三个时间点对大鼠骨髓间充质干细胞细胞活力进行检测。通过比较在450nm处测量的吸光度，血清淀粉样蛋白A促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖的能力如图2-1所示。与不同浓度的血清淀粉样蛋白A共同孵育3天后，1μg/ml和0.1μg/ml两个浓度组血清淀粉样蛋白A共培养的大鼠骨髓间充质干细胞与正常培养基培养的大鼠骨髓间充质干细胞相比，细胞增殖明显增加。不止如此，所有浓度组血清淀粉样蛋白A共培养的大鼠骨髓间充质干细胞的细胞增殖效果在第7天时都呈现出了明显的增强。有趣的是，通过各个浓度组之间比较不难发现，0.1μg/ml浓度组血清淀粉样蛋白A共培养的大鼠骨髓间充质干细胞，在第1天，第3天和第7天的细胞增殖效果均达到了峰值。图2-1大鼠骨髓间充质干细胞与0μg/ml，1μg/ml，0.1μg/ml或0.01μg/ml血清淀粉样蛋白A共培养后测定的细胞活力。*表示p<0.05，所有实验都进行了三重复。Figure1-2CellviabilityofrBMSCsco-culturedwith0μg/ml,1μg/ml,0.1μg/mlor0.01μg/mlSAA.*p<0.05,allexperimentswereperformedintriplicate.
本文编号：3245157
【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：83 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
一组典型的双向电泳凝胶对比图，图a是来自11个健康对照的人血清而图b来自11个激素性股骨头坏死患者
上海交通大学博士学位论文-15-ofHomosapiens97.3838766.4140IPI00011264CFHR1ComplementfactorH-relatedprotein1107.3838766.4232IPI00011264CFHR1ComplementfactorH-relatedprotein1117.3838766.4326IPI00011264CFHR1ComplementfactorH-relatedprotein1136.89194170.178IPI00418163C4BcomplementC4-Bpreproprotein145.6471474.7404IPI00019568F2Prothrombin(Fragment)154.8678174.4242IPI00017696C1SComplementC1ssubcomponent176.1345860.8237IPI00641737HPRHaptoglobin186.1345860.8268IPI00641737HPRHaptoglobin196.1345860.8227IPI00641737HPRHaptoglobin206.1338940.5467IPI00478493HPRhaptoglobinisoform2preproprotein216.2813580.5292IPI00552578SAA1;SAA2SerumamyloidAprotein2.3讨论自从股骨头坏死被发现和定义以来，该疾病的潜在分子机制一直是一个谜。尽管磁共振成像对股骨头坏死的早期诊断做出了巨大贡献，但未能及时评估疾病的活动状态和预后导致许许多多患者错失了最佳的治疗时机。现今蛋白质组学技术已被用于分析股骨头坏死患者蛋白水平的变化，从而来探索和发现股骨头坏死的生物标志物[36]。既往的研究已经确定了基质蛋白，血管生成因子与实验动物模型中股骨头坏死发生之间的关系[37,38]。然而，在研究股骨头坏死患者中血清蛋白图1-2对照组、激素性股骨头坏死组、酒精性股骨头坏死组、创伤性股骨头坏死组病人的血清SAA水平。Figure1-2SAAserumlevelofsteroid-induced,alcohol-induced,trauma-inducedONFHpatientsandhealthyvolunteers.
上海交通大学博士学位论文-31-3.1.9统计分析使用IBMSPSSStatistics20软件分析数据，用平均值±标准差（S.D.）表示所有数据。通过单因素方差分析（ANOVA）评估不同组之间的比较。P<0.05被认为具有统计学意义。3.2结果3.2.1血清淀粉样蛋白A促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖为了检验血清淀粉样蛋白A对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响，我们进行了CCK-8实验，在1天、3天和7天三个时间点对大鼠骨髓间充质干细胞细胞活力进行检测。通过比较在450nm处测量的吸光度，血清淀粉样蛋白A促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖的能力如图2-1所示。与不同浓度的血清淀粉样蛋白A共同孵育3天后，1μg/ml和0.1μg/ml两个浓度组血清淀粉样蛋白A共培养的大鼠骨髓间充质干细胞与正常培养基培养的大鼠骨髓间充质干细胞相比，细胞增殖明显增加。不止如此，所有浓度组血清淀粉样蛋白A共培养的大鼠骨髓间充质干细胞的细胞增殖效果在第7天时都呈现出了明显的增强。有趣的是，通过各个浓度组之间比较不难发现，0.1μg/ml浓度组血清淀粉样蛋白A共培养的大鼠骨髓间充质干细胞，在第1天，第3天和第7天的细胞增殖效果均达到了峰值。图2-1大鼠骨髓间充质干细胞与0μg/ml，1μg/ml，0.1μg/ml或0.01μg/ml血清淀粉样蛋白A共培养后测定的细胞活力。*表示p<0.05，所有实验都进行了三重复。Figure1-2CellviabilityofrBMSCsco-culturedwith0μg/ml,1μg/ml,0.1μg/mlor0.01μg/mlSAA.*p<0.05,allexperimentswereperformedintriplicate.
本文编号：3245157
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