丙戊酸钠联合唑来膦酸增强γδ T细胞介导的杀伤骨肉瘤效应

发布时间：2021-07-02 10:50

　　骨肉瘤是发病率最高的原发恶性骨肿瘤,常见于儿童和青少年,具有局部侵犯和早期肺转移的趋势。通过使用新辅助化疗联合手术的治疗方案,已经将骨肉瘤患者的5年生存率提高到了60%-80%,但在过去的近40年间并未得到进一步改善。尤其是对于复发和发生肺转移的患者,目前尚无有效的治疗手段,预后极差。同时,目前临床的一线化疗药,如甲氨蝶呤、阿霉素、顺铂、异环磷酰胺等毒副作用很大,且耐药的情况常有发生,疗效有限。因此,寻找新型、高效和安全的治疗方案是目前亟待解决的问题。免疫治疗被认为是除手术、化疗、放疗以外的第四大治疗手段。其中,过继细胞输注治疗（ACT）是最有前景的免疫治疗方案之一,已经在白血病的研究中取得了显著的成果。包括NK细胞、巨噬细胞和T细胞在内的各种免疫细胞均被研究应用于ACT中,尤其是T细胞,因其在抗肿瘤免疫效应中扮演着重要角色,成为ACT的首选效应细胞。然而,包括骨肉瘤在内的多数实体肿瘤,都缺少特异性、高表达的免疫治疗靶点,成为了ACT应用的一个主要限制因素。γδT细胞占外周血T细胞的1～10%,因其能够直接识别肿瘤细胞并且不依赖MHC的限制而被认为是充满前景的效应T细胞。活化的γδT细... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

VPA和ZOL对骨肉瘤细胞系的增殖抑制作用

PBMCs经ZOL+IL-2刺激后,γδT细胞比例逐渐升高,从day 1的3%左右到day14的85%左右,经过磁珠分选后,最终纯度达到95%以上(图1.2)。2.3.2.3 VPA联合ZOL协同增强γδT细胞杀伤骨肉瘤效应

为了明确VPA与ZOL致敏γδT细胞杀伤骨肉瘤细胞是否具有协同作用,本实验以4种骨肉瘤细胞系HOS、U2OS、MG63和Saos2为靶细胞,γδT细胞为效应细胞,E:T=10:1,共培养3 h。如图1.3,体外共培养的显微镜摄影显示,γδT细胞与无预处理或只有VPA预处理的骨肉瘤共培养后,并没有明显的杀伤肿瘤效应,只有在ZOL作用后的γδT细胞才能显著杀伤骨肉瘤细胞,而VPA联合ZOL处理组相比ZOL单处理组,其杀伤作用显著增强,几乎彻底杀灭了骨肉瘤细胞。进一步,MTS检测结果(图1.4)显示,ZOL能够致敏γδT细胞杀伤骨肉瘤细胞,而VPA无明显此作用,但VPA联合ZOL组能够进一步增强γδT细胞的杀伤效应。为明确VPA和ZOL联合作用是否有协同效应,我们使用周氏公式计算联合指数(64)。联合指数(CI)广泛被用于计算两种作用的协同效应,当CI<0.9,表明两种作用方式产生协同效应;当CI=0.9-1.1,表明仅仅是叠加效应;当CI>1.1,则表明拮抗作用。我们使用周氏公式计算了多种浓度下的VPA和ZOL诱导γδT细胞杀伤骨肉瘤效应的CI值(图1.5)。结果显示,在所有骨肉瘤细胞系中,不同浓度下的VPA和ZOL对应的CI值均小于0.9。尤其当VPA=2 mM,ZOL=4μM,联合指数分别为:HOS 0.415,U2OS0.3408,MG63 0.3903,Saos2 0.5333,表明具有显著的协同效应。为检测不同效靶比下的抗骨肉瘤细胞效应,我们使用1 mM VPA和2μM ZOL预处理骨肉瘤细胞系,然后分别以E:T=10:1/5:1/1:1将γδT细胞与肿瘤细胞共培养3 h,MTS结果显示,当E:T达到5:1时,就存在显著的协同效应(图1.6)。图1.4不同浓度下VPA联合ZOL协同致敏γδT细胞杀伤骨肉瘤效应


本文编号：3260330