重组SHH腺病毒纤维蛋白缓释支架在大鼠脊髓损伤中的应用
发布时间：2021-07-11 18:16
目的:近年来在脊髓损伤修复方面,干细胞/组织工程支架移植受到了研究者的广泛关注。基于神经干细胞在疾病损伤状态下具有自我更新并向神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞分化的能力,其对促进脊髓损伤的修复有着独特作用。本研究旨在探究:（1）包含重组SHH腺病毒的纤维蛋白胶（Fribin glue）缓释支架（FG-SHH）对体外培养的神经干细胞（Neural stem cells,NSCs）增殖与分化的影响;（2）构建大鼠脊髓损伤（Spinal Cord Injury,SCI）动物模型,移植FG-SHH缓释支架,观察其对内源性NSCs生物学特性的影响,评价其对大鼠脊髓损伤修复的效果。方法:（1）悬浮培养法在体外分离、培养NSCs,免疫荧光方法鉴定其表面标志物。（2）以重组腺病毒作为SHH基因的载体,将其以合适浓度注入纤维蛋白胶支架内,构建重组SHH腺病毒纤维蛋白胶缓释支架,并在扫描电镜下观察其微观结构,免疫荧光法和免疫印迹法检测支架缓释效果。（3）观察构建的缓释支架对NSCs增殖与分化的影响;实验分组:FG-SHH组、单纯NSCs组、单纯重组SHH腺病毒转染组（SHH）及单纯纤维蛋白胶支架组（FG...
【文章来源】：江苏大学江苏省
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
A、B、C分别为白光下第1、3、7d神经干细胞的形态
重组 SHH 腺病毒纤维蛋白缓释支架在脊髓损伤中的应用Fig 1.1 Culture of NSCs，（A）、（B）and（C）are the morphology of neural stem cells onday 1, 3 and 7 under microscope. bar = 50 μm.3.2 NSCs 的表面标志物鉴定取第三代神经干细胞，免疫荧光染色检测显示细胞球内的细胞均表达神经干细胞的特异性标志物蛋白 Nestin 和 SOX-2。提示分离培养的细胞为神经干细胞。
16) 回收一抗，用TBST洗膜3次，每次5-10 min；17) TBST稀释二抗（1:500），室温轻摇结合1 h；18) 回收二抗，用TBST洗膜3次，每次10 min；19) 沥去多余的TBST，荧光发光，扫描并记录结果，Image J软件析吸光度值。免疫荧光步骤已在第一章中阐述。3 结果3.1 重组 SHH 腺病毒纤维蛋白缓释支架表面结构将重组 SHH 腺病毒融于纤维蛋白胶后，得到包含重组 SHH 腺病毒纤维蛋白缓释支架。肉眼可见支架外观呈半透明，质地柔韧；扫描电镜下可见其呈现多孔网状交联结构。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Stem cells:a promising candidate to treat neurological disorders[J]. Chang-Geng Song,Yi-Zhe Zhang,Hai-Ning Wu,Xiu-Li Cao,Chen-Jun Guo,Yong-Qiang Li,Min-Hua Zheng,Hua Han. Neural Regeneration Research. 2018(07)
[2]探索脊背经穴在小儿脑性瘫痪中的临床辨治作用[J]. 张程,王雪峰,贾广良,杨天. 中国针灸. 2017(09)
[3]干细胞移植治疗脊髓损伤的研究进展[J]. 刘长路,吴岩. 中国组织工程研究与临床康复. 2011(32)
[4]神经干细胞移植治疗脊髓损伤的研究与现状[J]. 胡萌,吕刚. 中国组织工程研究与临床康复. 2009(19)
[5]血管内皮细胞生长因子165基因重组腺病毒的构建及其鉴定[J]. 韩焱福,宋建星,刘军. 中国组织工程研究与临床康复. 2008(24)
[6]神经干细胞体外研究的现状[J]. 王家增,孙晋浩,杨琳,李振华. 山东医学高等专科学校学报. 2006(05)
[7]星形胶质细胞诱导成年骨髓基质细胞分化成神经元样细胞的实验研究[J]. 张宏伟,张亚卓,张海燕,孙梅珍,王红云,李庆国,张鹏飞. 中华神经外科杂志. 2004(05)
[8]SHH方案诱导胚胎干细胞分化为神经干细胞移植促进小鼠损伤脊髓结构与功能的恢复[J]. 曲静,张洪涛,薛群,陈永井,胡玉敏,周时勇,王明元,方振羊,杨惠林,惠国桢,张学光. 中华神经外科杂志. 2004(03)
[9]神经干细胞的研究进展[J]. 张国福,林建华. 福建中医药. 2003(03)
[10]慢病毒载体与基因治疗[J]. 杨玉芳. 国外医学.病毒学分册. 2003(03)
博士论文
[1]细胞周期调控对大鼠脊髓损伤后轴突再生微环境的干预机制研究[D]. 田代实.华中科技大学 2007
[2]重组腺病毒介导的可调控人胰岛素基因治疗Ⅰ型糖尿病的实验研究[D]. 徐美东.复旦大学 2006
本文编号：3278603
【文章来源】：江苏大学江苏省
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
A、B、C分别为白光下第1、3、7d神经干细胞的形态
重组 SHH 腺病毒纤维蛋白缓释支架在脊髓损伤中的应用Fig 1.1 Culture of NSCs，（A）、（B）and（C）are the morphology of neural stem cells onday 1, 3 and 7 under microscope. bar = 50 μm.3.2 NSCs 的表面标志物鉴定取第三代神经干细胞，免疫荧光染色检测显示细胞球内的细胞均表达神经干细胞的特异性标志物蛋白 Nestin 和 SOX-2。提示分离培养的细胞为神经干细胞。
16) 回收一抗，用TBST洗膜3次，每次5-10 min；17) TBST稀释二抗（1:500），室温轻摇结合1 h；18) 回收二抗，用TBST洗膜3次，每次10 min；19) 沥去多余的TBST，荧光发光，扫描并记录结果，Image J软件析吸光度值。免疫荧光步骤已在第一章中阐述。3 结果3.1 重组 SHH 腺病毒纤维蛋白缓释支架表面结构将重组 SHH 腺病毒融于纤维蛋白胶后，得到包含重组 SHH 腺病毒纤维蛋白缓释支架。肉眼可见支架外观呈半透明，质地柔韧；扫描电镜下可见其呈现多孔网状交联结构。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Stem cells:a promising candidate to treat neurological disorders[J]. Chang-Geng Song,Yi-Zhe Zhang,Hai-Ning Wu,Xiu-Li Cao,Chen-Jun Guo,Yong-Qiang Li,Min-Hua Zheng,Hua Han. Neural Regeneration Research. 2018(07)
[2]探索脊背经穴在小儿脑性瘫痪中的临床辨治作用[J]. 张程,王雪峰,贾广良,杨天. 中国针灸. 2017(09)
[3]干细胞移植治疗脊髓损伤的研究进展[J]. 刘长路,吴岩. 中国组织工程研究与临床康复. 2011(32)
[4]神经干细胞移植治疗脊髓损伤的研究与现状[J]. 胡萌,吕刚. 中国组织工程研究与临床康复. 2009(19)
[5]血管内皮细胞生长因子165基因重组腺病毒的构建及其鉴定[J]. 韩焱福,宋建星,刘军. 中国组织工程研究与临床康复. 2008(24)
[6]神经干细胞体外研究的现状[J]. 王家增,孙晋浩,杨琳,李振华. 山东医学高等专科学校学报. 2006(05)
[7]星形胶质细胞诱导成年骨髓基质细胞分化成神经元样细胞的实验研究[J]. 张宏伟,张亚卓,张海燕,孙梅珍,王红云,李庆国,张鹏飞. 中华神经外科杂志. 2004(05)
[8]SHH方案诱导胚胎干细胞分化为神经干细胞移植促进小鼠损伤脊髓结构与功能的恢复[J]. 曲静,张洪涛,薛群,陈永井,胡玉敏,周时勇,王明元,方振羊,杨惠林,惠国桢,张学光. 中华神经外科杂志. 2004(03)
[9]神经干细胞的研究进展[J]. 张国福,林建华. 福建中医药. 2003(03)
[10]慢病毒载体与基因治疗[J]. 杨玉芳. 国外医学.病毒学分册. 2003(03)
博士论文
[1]细胞周期调控对大鼠脊髓损伤后轴突再生微环境的干预机制研究[D]. 田代实.华中科技大学 2007
[2]重组腺病毒介导的可调控人胰岛素基因治疗Ⅰ型糖尿病的实验研究[D]. 徐美东.复旦大学 2006
本文编号：3278603
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