组织工程化VEGF和NT-3共释放治疗脊髓半切损伤的血管修复与神经再生研究
发布时间：2021-07-28 19:28
【目的】:评估在大鼠脊髓半切损伤部位共释放VEGF和NT-3的血管修复与神经再生促进作用。【方法】:1.采用了乳化溶剂挥发法制备封装VEGF、NT-3微球（V-NPs、N-NPS）和空白微球（blank PLGA NPs B-NPs）,并观测微球表征,测得其药物封包率高及缓释性能良好;2.大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）的分离培养及鉴定;3.制备脊髓脱细胞支架（ASCS）及ASCS与BMSCs共培养;4.大鼠脊髓损伤动物模型制备;5.实验动物模型的分组及其分组方法;6.4个实验组分别于术后第1、8周处死指定数量大鼠,取损伤部位脊髓,采用免疫荧光染色、HE染色和尼氏体及髓鞘染色观察其血管生成、神经再生、各移植物、宿主组织的结构整合度、损伤部位空腔大小、损伤部位瘢痕形成情况等;并分别在大鼠术后第3天、1、2、4、6、8周使用BBB运动功能评定量表评定运动行为。【结果】1.成功制备V-NPS、N-NPS和B-NPS,并测得其表征、包封率及释放动力学。2.成功培养制备骨髓间充质干细胞,并通过培养验证其多向分化能力。3.成功制备脊髓脱细胞支架及ASCS-BMSCs共培养。通过HE染色后观察到,...
【文章来源】：福建医科大学福建省
【文章页数】：50 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
通过对RECA1阳性细胞免疫荧光染色后来观察脊髓内血管的变化（绿色），细胞的细胞核用DAPI复染（蓝色）
图 3:运用免疫荧光染色轴突蛋白的特异性标志物 NF-H（绿色），显示脊髓半切损伤后 8 周各组之间神经轴突表达的差异。脊髓损伤/种植区域的纵切面大致镜下观如图 A-D，图中方形标注区在高倍图像中的显示分别见图中相应标注位置，细胞核用 DAPI 复染（蓝色）。定量结果表明，NF-H 阳性细胞百分比在 ABVN 组最高，其次为 ABC 组，对照组最低。6 手术后病变部位的神经和星形胶质细胞增生情况为确定是否 VEGF165 和 NT-3 的共同配送能提高神经元的存活率同时抑制胶质瘢痕形成，在术后 8 周，以病灶部位为中心对神经元和胶质纤维酸性蛋白进行双重免疫荧光染色。病变部位的免疫荧光图像取自低倍显微镜，在图 4A-D 显示。不同治疗组大鼠神经元和星形胶质细胞增生的情况在图 4A-D 后的高倍放大镜图像中显示。在假手术组，双标记的组织表现出正常的 NeuN 阳性神经元外观和胶质纤维酸性蛋白阳性星形胶质细胞的规则排列，对照组可见明显的胶质瘢痕及神经元存活的缺乏，相比假手术组，在 ABVN 组神经元较小，密度较稀疏，然而，它们的大小和密度比 ABC 组要好得多，且 ABC 组比 ABVN 组 GFAP 阳性星形胶质细
22图 4：图像显示术后 8 周取各组大鼠脊髓病变部位进行双重免疫荧光染色（NeuN 神经元，红色）、GFAP（星形胶质细胞、绿色）的区别。病变部位的纵切面大致镜下观如图 A-D，为了更好的显示 NeuN 和 GFAP 的表达，图中方形标注区在高倍图像中的显示分别见图中相应标注位置，细胞核用 DAPI 复染（蓝色）。NeuN 阳性神经元的定量结果表明，4 组间两两比较的差异有统计学意义。（E）对 GFAP 百分比的定量结果显示，阳性胶质瘢痕在对照组和 ABC组高于 ABVN 组，差异有统计学意义。7 手术后病变部位空洞的形成和髓鞘再生情况通过 HE 染色后图像，测量手术后脊髓内空洞的大小（使用 4×物镜，如图
【参考文献】：
期刊论文
[1]血管内皮细胞联合同种异体神经移植修复长距离大鼠坐骨神经缺损[J]. 徐沁同,孟德华,张键,潘剑锋,江立波,陈增淦,William C.Lineaweaver,张峰. 中国临床医学. 2017(03)
[2]胚胎脊髓移植结合神经生长因子对损伤脊髓老年大鼠的修复作用[J]. 解锦鼎,安宁,曹文慧,杨晓帆,李小苹. 中国老年学杂志. 2016(21)
[3]Human amniotic epithelial cells combined with silk fibroin scaffold in the repair of spinal cord injury[J]. Ting-gang Wang,Jie Xu,Ai-hua Zhu,Hua Lu,Zong-ning Miao,Peng Zhao,Guo-zhen Hui,Wei-jiang Wu. Neural Regeneration Research. 2016(10)
[4]干细胞治疗脊髓损伤的研究与应用[J]. 彭道琥. 临床医药文献电子杂志. 2016(34)
[5]细胞外基质来源支架在软骨组织工程中的应用[J]. 肖统光,张一民,郭维民,刘舒云,杨建华,郭全义. 中国组织工程研究. 2016(38)
[6]异种源性脱细胞神经支架修复坐骨神经损伤后再生的可行性[J]. 陈少红,季婉青,侯博. 中国医学创新. 2016(20)
[7]脊髓损伤修复再生支架材料研究进展[J]. 张驰,高明勇,全大萍. 高分子通报. 2016(05)
[8]脱细胞脊髓基质支架的制备及生物特性[J]. 李一鹏,陈旭义,朱祥,卢磊,涂悦. 中国组织工程研究. 2015(21)
[9]羟基红花黄色素A对急性脊髓损伤模型大鼠神经细胞凋亡的影响[J]. 侯兆阳,陈哲,魏家森. 浙江中西医结合杂志. 2014(09)
[10]BMSCs联合去细胞肌肉生物支架修复大鼠脊髓半切损伤的实验研究[J]. 魏祥科,文益民,张涛,李含. 中国修复重建外科杂志. 2012(11)
硕士论文
[1]电针联合神经生长因子对MCAO大鼠神经再生的影响[D]. 陈晶.广州中医药大学 2016
[2]NGF联合VEGF对脊髓损伤的修复作用[D]. 孟繁东.山东大学 2010
[3]1.神经营养因子和生长因子在创伤性脑损伤中的应用 2.生长因子治疗缺血性脑损伤的研究进展[D]. 张茂.浙江大学 2002
本文编号：3308502
【文章来源】：福建医科大学福建省
【文章页数】：50 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
通过对RECA1阳性细胞免疫荧光染色后来观察脊髓内血管的变化（绿色），细胞的细胞核用DAPI复染（蓝色）
图 3:运用免疫荧光染色轴突蛋白的特异性标志物 NF-H（绿色），显示脊髓半切损伤后 8 周各组之间神经轴突表达的差异。脊髓损伤/种植区域的纵切面大致镜下观如图 A-D，图中方形标注区在高倍图像中的显示分别见图中相应标注位置，细胞核用 DAPI 复染（蓝色）。定量结果表明，NF-H 阳性细胞百分比在 ABVN 组最高，其次为 ABC 组，对照组最低。6 手术后病变部位的神经和星形胶质细胞增生情况为确定是否 VEGF165 和 NT-3 的共同配送能提高神经元的存活率同时抑制胶质瘢痕形成，在术后 8 周，以病灶部位为中心对神经元和胶质纤维酸性蛋白进行双重免疫荧光染色。病变部位的免疫荧光图像取自低倍显微镜，在图 4A-D 显示。不同治疗组大鼠神经元和星形胶质细胞增生的情况在图 4A-D 后的高倍放大镜图像中显示。在假手术组，双标记的组织表现出正常的 NeuN 阳性神经元外观和胶质纤维酸性蛋白阳性星形胶质细胞的规则排列，对照组可见明显的胶质瘢痕及神经元存活的缺乏，相比假手术组，在 ABVN 组神经元较小，密度较稀疏，然而，它们的大小和密度比 ABC 组要好得多，且 ABC 组比 ABVN 组 GFAP 阳性星形胶质细
22图 4：图像显示术后 8 周取各组大鼠脊髓病变部位进行双重免疫荧光染色（NeuN 神经元，红色）、GFAP（星形胶质细胞、绿色）的区别。病变部位的纵切面大致镜下观如图 A-D，为了更好的显示 NeuN 和 GFAP 的表达，图中方形标注区在高倍图像中的显示分别见图中相应标注位置，细胞核用 DAPI 复染（蓝色）。NeuN 阳性神经元的定量结果表明，4 组间两两比较的差异有统计学意义。（E）对 GFAP 百分比的定量结果显示，阳性胶质瘢痕在对照组和 ABC组高于 ABVN 组，差异有统计学意义。7 手术后病变部位空洞的形成和髓鞘再生情况通过 HE 染色后图像，测量手术后脊髓内空洞的大小（使用 4×物镜，如图
【参考文献】：
期刊论文
[1]血管内皮细胞联合同种异体神经移植修复长距离大鼠坐骨神经缺损[J]. 徐沁同,孟德华,张键,潘剑锋,江立波,陈增淦,William C.Lineaweaver,张峰. 中国临床医学. 2017(03)
[2]胚胎脊髓移植结合神经生长因子对损伤脊髓老年大鼠的修复作用[J]. 解锦鼎,安宁,曹文慧,杨晓帆,李小苹. 中国老年学杂志. 2016(21)
[3]Human amniotic epithelial cells combined with silk fibroin scaffold in the repair of spinal cord injury[J]. Ting-gang Wang,Jie Xu,Ai-hua Zhu,Hua Lu,Zong-ning Miao,Peng Zhao,Guo-zhen Hui,Wei-jiang Wu. Neural Regeneration Research. 2016(10)
[4]干细胞治疗脊髓损伤的研究与应用[J]. 彭道琥. 临床医药文献电子杂志. 2016(34)
[5]细胞外基质来源支架在软骨组织工程中的应用[J]. 肖统光,张一民,郭维民,刘舒云,杨建华,郭全义. 中国组织工程研究. 2016(38)
[6]异种源性脱细胞神经支架修复坐骨神经损伤后再生的可行性[J]. 陈少红,季婉青,侯博. 中国医学创新. 2016(20)
[7]脊髓损伤修复再生支架材料研究进展[J]. 张驰,高明勇,全大萍. 高分子通报. 2016(05)
[8]脱细胞脊髓基质支架的制备及生物特性[J]. 李一鹏,陈旭义,朱祥,卢磊,涂悦. 中国组织工程研究. 2015(21)
[9]羟基红花黄色素A对急性脊髓损伤模型大鼠神经细胞凋亡的影响[J]. 侯兆阳,陈哲,魏家森. 浙江中西医结合杂志. 2014(09)
[10]BMSCs联合去细胞肌肉生物支架修复大鼠脊髓半切损伤的实验研究[J]. 魏祥科,文益民,张涛,李含. 中国修复重建外科杂志. 2012(11)
硕士论文
[1]电针联合神经生长因子对MCAO大鼠神经再生的影响[D]. 陈晶.广州中医药大学 2016
[2]NGF联合VEGF对脊髓损伤的修复作用[D]. 孟繁东.山东大学 2010
[3]1.神经营养因子和生长因子在创伤性脑损伤中的应用 2.生长因子治疗缺血性脑损伤的研究进展[D]. 张茂.浙江大学 2002
本文编号：3308502
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/waikelunwen/3308502.html
最近更新
教材专著
