异丹叶大黄素和白藜芦醇抑制骨肉瘤生长及免疫调节作用的研究

发布时间：2021-07-28 23:16

　　目的:探讨异丹叶大黄素（Isorhapontigenin,ISO）和白藜芦醇（Resveratrol,RES）抑制骨肉瘤K7M2细胞生长及免疫调节的作用,并明确相应的细胞和分子机制,为骨肉瘤的治疗提供新的实验依据。方法:（1）不同浓度的ISO和RES体外处理K7M2细胞,MTT检测细胞增殖情况。（2）流式细胞术检测ISO和RES对K7M2细胞凋亡和细胞周期的影响。（3）实时定量多聚酶链聚合反应（RT-qPCR）检测ISO和RES对K7M2细胞凋亡和细胞周期相关基因表达量的影响。（4）蛋白质免疫印迹法（Western Blot）检测ISO和RES对K7M2细胞凋亡和细胞周期相关蛋白表达量的影响。（5）流式细胞术检测ISO和RES在体外对K7M2细胞表面MHC分子表达量的影响。（6）构建荷骨肉瘤小鼠模型,每天监测肿瘤体积及小鼠体重,并根据小鼠体重于瘤周注射不同浓度的ISO和RES,第16 d处死小鼠并获取肝、肾和移植瘤组织,将肝肾组织染色观察药物毒副作用,流式细胞术检测肿瘤细胞表面MHC分子表达量和移植瘤组织中浸润的CD8⁺T细胞、NK细胞、NKT细胞、MDSCs和T... 

【文章来源】：三峡大学湖北省

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

ISO和RES显著抑制K7M2细胞增殖注：ISO和RES处理K7M2细胞后，MTT检测药物对细胞的增殖抑制效应；A、B，ISO组（A）

24图 2.2 ISO 和 RES 显著诱导 K7M2 细胞凋亡：A、C， ISO（A）和 RES（C）处理 K7M2 细胞后用流式细胞术检测细胞凋亡的实验结果代图，横坐标为荧光素 PE 标记的 Annexin V（重组膜黏连蛋白 5）染色，纵坐标为 7-AAD 染色；下象限为早期凋亡细胞，右上象限为晚期凋亡细胞，左上象限为坏死细胞，左下象限为存活细；B、D，ISO 组（B）和 RES 组（D）统计分析图，取凋亡细胞（右上加右下象限）、坏死细和存活细胞数值统计分析，n=3，NS 代表用药组与 DMSO 组相比较无显著性差异；*代表用药与 DMSO 组相比较，P＜0.05；**代表用药组与 DMSO 组相比较，P＜0.01；***代表用药组与MSO 组相比较，P＜0.001.1.3 ISO 和 RES 显著阻滞骨肉瘤细胞 K7M2 细胞周期进程流式细胞术检测细胞周期发现，如图 2.3A、B 所示，与 DMSO 组 G0/G1 期的

图 2.3 ISO 和 RES 阻滞 K7M2 细胞周期进程注：A、C，ISO（A）和 RES（C）处理 K7M2 细胞后用流式细胞术检测细胞周期的实验结果代表图；B、D，ISO 组（B）和 RES 组（D）统计分析图，取细胞周期各阶段百分比数值进行统计分析，n=3，NS 代表用药组与 DMSO 组相比较无显著性差异；*代表用药组与 DMSO 组相比较，P＜0.052.1.4 ISO和RES对细胞凋亡和细胞周期相关基因mRNA和蛋白水平表达量的影响2.1.4.1 RT-qPCR 结果RT-qPCR 实验结果发现：图 2.4A 所示，与对照组（DMSO 组）相比较，40 μM ISO处理后，K7M2细胞X连锁凋亡抑制蛋白（X-linked inhibitor of apoptosis protein, XIAP)鼠类肉瘤病毒癌基因（kirsten rat sarcoma viral oncogene, Kras), Mcl-1 基因（myeloidcell leukemia-1）, B 淋巴细胞瘤-2 基因（B-cell lymphoma-2, Bcl-2）和 CyclinD1 mRNA


本文编号：3308840