脂肪来源间充质干细胞旁分泌因子抗病理性瘢痕成纤维细胞纤维化的作用及分子机制的研究

发布时间：2021-08-04 15:48

　　研究背景增生性瘢痕（hypertrophic scar）及瘢痕疙瘩（keloid）是伤口愈合过程调节异常导致的一类纤维化疾病,以成纤维细胞过度增殖,表皮间质转化,肌成纤维细胞增多,细胞外基质（ECM）过度沉积为主要特征。二者组织学方面差异不明显,临床表现则各异,增生性瘢痕常常局限于受伤部位,高出皮肤表面,偶有疼痛、瘙痒等不适,发展时限常超过1年,但存在一定的自限性,随着时间的延长可逐渐萎缩;而瘢痕疙瘩则常常超出病变边缘,具有侵袭性,明显高出皮肤表面,有疼痛、痉痒的症状出现,发展时限可长达数年,不能随着时间的延长而自行改善。且由于此类疾病的病理生理机制复杂,临床上一直缺乏有效的治疗手段。近年来,干细胞被广泛应用到临床治疗中,大量的研究表明,间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）可以促进组织的高质量愈合。而脂肪来源的间充质干细胞（ADSCs）相较于其它种类的间充质干细胞具有来源广泛,供区损伤小,组织相容性好的优点。但目前关于脂肪来源间充质干细胞对增生性瘢痕以及瘢痕疙瘩来源的成纤维细胞的生物学行为影响以及相关作用机制的研究尚未完善。现有研究表明,TGF-β1的... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：88 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１?Ｍ?ｅＭｅｇａｆｌｉｇｅ离心机?附

中国医学科学院北京协和医学院?博士研宄生学位论文??状，移入５０ｍｌ离心管，加入等体积的０．０７５％的Ｉ型胶原酶，置于摇床上消化４５ｍｉｎ??（３７〇Ｃ，?１８０ｒ／ｍｉｎ）；??２）消化后的脂肪颗粒加入等体积的含１０％胎牛血清的间充质干细胞完全培养基??终止消化，１００目滤网过滤，滤液离心３ｍｉｎ?（１０００ｒｐｍ，１０ｍｉｎ）；??３）弃上清后所得沉淀用５ｍｌ完培重悬，细胞计数后适当稀释，以ｌＸｌ〇５／ｃｍ２的??密度接种于培养皿中，置于３７°Ｃ含５％Ｃ０２的恒温培养箱中培养，获取原代细胞Ｐ０。??４８?ｈ后首次换液去除未贴壁细胞，此后每７２ｈ换液一次；??４）待细胞长至８０％?—?９０％融合时ＰＢＳ漂洗两次，０．２５％胰酶ｌｍｌ培养箱孵育??２－３ｍｍ，低倍镜下观察细胞缩小变圆，脱壁后加入等体积完培终止消化；??５）细胞悬液离心３ｍｉｎ?（１０００ｒｐｍ／ｍｉｎ）后弃上清，以间充质干细胞完全培养基??重悬，充分轻柔吹打至均匀后１：３传代，同法传代培养至Ｐ３备用。??

附图１?Ｍ?ｅＭｅｇａｆｌｉｇｅ离心机?附图２层流超净台内提取原代细胞??２．２ｈＡＤＳＣｓ表面标记物的流式鉴定??１）Ｐ３代ｈＡＤＳＣｓ消化离心后以ＰＢＳ重悬细胞团，计数细胞密度，调整至１Ｘ１０６??个／ｍｌ，分装至ＥＰ管，每管ｌｍｌ；??２）将抗人?ＣＤ９０、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ１０５、ＣＤ７３、ＣＤ１０６?分别加入分装好的?ＥＰ??管中，４°Ｃ避光孵育３０ｍｉｎ；??３）细胞悬液４°Ｃ离心，以预冷的ＰＢＳ洗涤３次去除未结合的抗体，ＰＢＳ重悬；??４）３００目细胞筛过滤后加等量鞘液，摇匀后上机，流式细胞仪记录结果并分析。??

【参考文献】：
期刊论文
[1]细胞生长因子与创伤愈合[J]. 刘晓,王建,卢光琇.  现代生物医学进展. 2008(09)
[2]Transforming growth factor-β and fibrosis[J]. Franck Verrecchia,Alain Mauviel.  World Journal of Gastroenterology. 2007(22)
[3]转化生长因子-β3对增生性瘢痕成纤维细胞的生物学作用（英文）[J]. 唐世杰,胡素銮,王玉银,申纪奎.  中国临床康复. 2004(17)



本文编号：3321974