槲皮素复合生物活性玻璃水凝胶促进关节软骨缺损修复及腱骨愈合的研究

发布时间：2021-08-05 08:20

　　关节软骨主要由软骨细胞以及其分泌的细胞外基质构成。在正常的关节软骨组织内基本无血管或淋巴管等,因此受损后难以自行修复。肌腱连接骨与肌肉的部位称为腱骨连接,其结构分别由肌腱、纤维软骨、骨构成。这其中,纤维软骨在力学方面具有重要作用,一旦出现损伤,机体多以瘢痕愈合进行修复,其强度较差,易发生二次损伤。在关节软骨损伤或腱骨连接损伤发生后,机体会产生较强炎症反应,刺激基质金属蛋白酶等软骨细胞外基质降解酶的合成,打破外基质代谢平衡,软骨组织难以修复。目前常规治疗手段针对关节软骨缺损修复以及腱骨愈合均难以取得良好的修复效果。为此,我们构建了一种具有抗炎作用及软骨保护作用的可注射载药水凝胶。一方面,作为载药系统的生物活性玻璃水凝胶,具有一定的抗炎作用及软骨保护作用,另一方面,通过搭载同样具有抗炎作用及软骨保护作用的槲皮素来增强水凝胶相关能力。体外实验证实,该复合水凝胶具有维持软骨细胞表型的能力,使得软骨细胞持续分泌二型胶原蛋白等软骨细胞外基质主要成分;该复合水凝胶具有抗炎能力,可以促进巨噬细胞向M2型极化、下调退变软骨细胞中外基质降解酶的表达。此外,该水凝胶具有可注射性,使用方便。在复合水凝胶材料植... 

【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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大鼠软骨细胞的甲苯胺蓝染色（标尺：100μm）

上海交通大学博士学位论文11甲苯胺蓝染色使细胞内蛋白多糖呈蓝紫色，可鉴定细胞是否具有分泌合成软骨细胞外基质的功能。如图2-1所示，在显微镜下可以观察到，细胞的细胞膜和细胞浆呈现蓝色，细胞核染色深于细胞质，细胞甲苯胺蓝染色呈阳性。证实所提取细胞为大鼠软骨细胞。2.4.3II型胶原免疫荧光染色如图2-2所示，在荧光显微镜下，细胞中细胞膜和胞质呈黄绿色荧光，细胞核呈蓝色。绿色荧光显示了细胞呈现出软骨细胞外基质标记物Ⅱ型胶原的表达。证实细胞为大鼠软骨细胞。图2-2大鼠软骨细胞的II型胶原免疫荧光染色（标尺：50μm）Fig.2-2CollagenIIimmunofluorescencestainingofratchondrocytes（Scalebar：50μm）2.5小结关节软骨细胞、肋软骨细胞均属于透明软骨细胞，其主要特点是中含有较多的II型胶原和糖胺聚糖。在3周龄大鼠中，其股骨头未出现骨化，为透明软骨。本实验选择取用此处关节软骨与膝关节部分软骨作为细胞来源，用双酶消化法提取原代大鼠软骨细胞。既往文献中多采用上述方法获得原代软骨细胞，但在胰酶的消化时间及II型胶原酶的消化时间上略有不同。多次提取原代软骨细胞后，我们发现，在II型胶

蘧?%海藻酸钠溶液以及液体状态下的2%琼脂糖溶液后,用电子分析天平称取3.0mg的槲皮素，加入到一个5mL的注射器中，注射器内吸取2.5mL的琼脂糖溶液，充分混匀，在一个注射器内吸取2.5mL的海藻酸钠溶液，将2个注射器连接在三通管的两端，使得注射器之间联通，排尽注射器内的空气后交替挤压注射器将琼脂糖溶液和海藻酸钠溶液通过三通管混合，交替挤压使得两溶液均匀混合。随着混合溶液温度的降低，琼脂糖会开始缓慢凝胶，从而得到可注射的海藻酸钠/琼脂糖水凝胶。按照上述比例配制的可注射水凝胶，在室温下凝胶温度约为37℃。图3-1Que-BG水凝胶材料的形貌特征Fig.3-1MorphologicalcharacteristicsofQue-BGhydrogel

【参考文献】：
期刊论文
[1]应用大鼠血清建立体外软骨细胞退变模型[J]. 王小军,张浩,詹红生,丁道芳.  浙江大学学报(医学版). 2015 (03)



本文编号：3323409