长链非编码RNA CCAT2以及miR-200b/VEGF在骨肉瘤中调控作用的机制研究
发布时间：2021-08-06 07:18
研究背景骨肉瘤（Osteosarcoma,OSA）是一种由骨间质细胞发展而来,常发病于青少年的恶性肿瘤。其恶性程度高,易转移且预后差。长链非编码RNA（Long non-coding RNAs,lncRNAs）是一类长度大于200个核苷酸的RNA转录物。由于其缺少开放阅读编码框（Opening reading frame,OFR）,故不能编码蛋白。近年来,许多文献报道lncRNAs能够在多种人类肿瘤中发挥调控作用。结肠癌相关转录因子2（Colon cancer-associated transcript 2,CCAT2）是一种新近发现的lncRNA,在多种肿瘤中表现促进肿瘤生长的作用。研究目的本研究旨在探究CCAT2是否参与骨肉瘤发生发展,以及可能涉及miR-200b的内在调控机制。实验首先检测CCAT2和miR-200b在骨肉瘤组织及相应的癌旁组织样本,以及骨肉瘤细胞及人正常成骨细胞中的表达。随后分析沉默CCAT2后,骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的改变。研究方法首先收集骨肉瘤组织样本及相应的癌旁组织样本,并培养人骨肉瘤MG63,U20S,US732,Saos-2细胞及人正常成...
【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：119 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图２－１?ＣＣＡＴ２在骨肉瘤（Ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ，?ＯＳＡ）组织及其细胞系发生高表达
２．３．３?ＣＣＡＴ２沉畎抑制细胞活力??将ｓｉ－ＣＣＡＴ２转染至骨肉瘤细胞系ＭＧ６３和Ｕ２０Ｓ中后，我们采用ｑＲＴ－ＰＣＲ的方法??验证转染效率，结果如图２－３所示，ＭＧ６３?（尸＜?０．０１）和Ｕ２０Ｓ?（尸＜?０．０１）细胞系转染??ｓｉ－ＣＣＡＴ２后，细胞中的ＣＣＡＴ２的表达量显著降低，由此可证明，我们有效地构建了??ＣＣＡＴ２低表达的骨肉瘤细胞系ＭＧ６３和Ｕ２〇Ｓ。相应地，为探宄ＣＣＡＴ２沉默对骨肉瘤细??胞生命活动的影响，我们进一步检测并分析了细胞活力、凋亡、增殖、迁移和侵袭以及相??关蛋白表达量的变化。??■Ｂ?Ｃｏｎｔｎｉ?ｍ?Ｓｔ＜ＮＣ?ａｍ?？ｉ－ＣＣＡＴ２??Ｈｉｆ?ｉｆ??ｉｉｌｌｉｉＬ??ＭＯＭ?ＣＣＡＴ２?Ｕ２０Ｓ??图２－３?ＭＧ６３和Ｕ２０Ｓ细胞转染ｓｉ－ＣＣＡＴ２后，ＣＣＡＴ２表达受到抑制。采用ｑＲＴ－ＰＣＲ方法测定??ＭＧ６３和Ｕ２０Ｓ细胞中ＣＣＡＴ２的表量。数据均表示为平均数＋标准偏差（Ｓｔａｎｄａｒｄ?ｄｅｖｉａｔｉｏｎ，?ＳＤ）?（Ｎ??＝３，＊＊／＞＜?０．０１同对照组相比具有显著性差异）。??Ｆｉｇ．?２－３?ＣＣＡＴ２?ｗａｓ?ｋｎｏｃｋｅｄ?ｄｏｗｎ?ｉｎ?ＭＧ６３?ａｎｄ?Ｕ２０Ｓ?ｃｅｌｌｓ?ｂｙ?ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｎｇ?ｗｉｔｈ?ｓｉ－ＣＣＡＴ２．?ｑＲＴ－ＰＣＲ??ａｎａｌｙｓｉｓ?ｗａｓ?ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ?ｔｏ?ｄｅｔｅｃｔ?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＣＣＡＴ２?ｉｎ?ｔｈｅ?ＭＧ６３?ａｎｄ?Ｕ２０Ｓ?ｃｅｌｌｓ．?Ａｌｌ?ｄａｔａ?ｗｅｒｅ??ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ?ａｓ?ｍｅａｎ?＋?ＳＤ?（Ｎ?＝?３
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【参考文献】：
期刊论文
[1]肿瘤miRNAs调控机制的研究进展与展望[J]. 黄辰,刘利英,倪磊,宋土生. 西安交通大学学报(医学版). 2015(04)
[2]三氧化二砷下调MG-63骨肉瘤细胞IEX-1基因表达的转录调控机制研究[J]. 肖涛,朱武,姚茂金,方建珍,罗远明,曾伟,胡金玺. 生物化学与生物物理进展. 2008(07)
本文编号：3325338
【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：119 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图２－１?ＣＣＡＴ２在骨肉瘤（Ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ，?ＯＳＡ）组织及其细胞系发生高表达
２．３．３?ＣＣＡＴ２沉畎抑制细胞活力??将ｓｉ－ＣＣＡＴ２转染至骨肉瘤细胞系ＭＧ６３和Ｕ２０Ｓ中后，我们采用ｑＲＴ－ＰＣＲ的方法??验证转染效率，结果如图２－３所示，ＭＧ６３?（尸＜?０．０１）和Ｕ２０Ｓ?（尸＜?０．０１）细胞系转染??ｓｉ－ＣＣＡＴ２后，细胞中的ＣＣＡＴ２的表达量显著降低，由此可证明，我们有效地构建了??ＣＣＡＴ２低表达的骨肉瘤细胞系ＭＧ６３和Ｕ２〇Ｓ。相应地，为探宄ＣＣＡＴ２沉默对骨肉瘤细??胞生命活动的影响，我们进一步检测并分析了细胞活力、凋亡、增殖、迁移和侵袭以及相??关蛋白表达量的变化。??■Ｂ?Ｃｏｎｔｎｉ?ｍ?Ｓｔ＜ＮＣ?ａｍ?？ｉ－ＣＣＡＴ２??Ｈｉｆ?ｉｆ??ｉｉｌｌｉｉＬ??ＭＯＭ?ＣＣＡＴ２?Ｕ２０Ｓ??图２－３?ＭＧ６３和Ｕ２０Ｓ细胞转染ｓｉ－ＣＣＡＴ２后，ＣＣＡＴ２表达受到抑制。采用ｑＲＴ－ＰＣＲ方法测定??ＭＧ６３和Ｕ２０Ｓ细胞中ＣＣＡＴ２的表量。数据均表示为平均数＋标准偏差（Ｓｔａｎｄａｒｄ?ｄｅｖｉａｔｉｏｎ，?ＳＤ）?（Ｎ??＝３，＊＊／＞＜?０．０１同对照组相比具有显著性差异）。??Ｆｉｇ．?２－３?ＣＣＡＴ２?ｗａｓ?ｋｎｏｃｋｅｄ?ｄｏｗｎ?ｉｎ?ＭＧ６３?ａｎｄ?Ｕ２０Ｓ?ｃｅｌｌｓ?ｂｙ?ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｎｇ?ｗｉｔｈ?ｓｉ－ＣＣＡＴ２．?ｑＲＴ－ＰＣＲ??ａｎａｌｙｓｉｓ?ｗａｓ?ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ?ｔｏ?ｄｅｔｅｃｔ?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＣＣＡＴ２?ｉｎ?ｔｈｅ?ＭＧ６３?ａｎｄ?Ｕ２０Ｓ?ｃｅｌｌｓ．?Ａｌｌ?ｄａｔａ?ｗｅｒｅ??ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ?ａｓ?ｍｅａｎ?＋?ＳＤ?（Ｎ?＝?３
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【参考文献】：
期刊论文
[1]肿瘤miRNAs调控机制的研究进展与展望[J]. 黄辰,刘利英,倪磊,宋土生. 西安交通大学学报(医学版). 2015(04)
[2]三氧化二砷下调MG-63骨肉瘤细胞IEX-1基因表达的转录调控机制研究[J]. 肖涛,朱武,姚茂金,方建珍,罗远明,曾伟,胡金玺. 生物化学与生物物理进展. 2008(07)
本文编号：3325338
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