ERK/MAPK信号通路对划伤后星形胶质细胞中AQP4极性表达的影响及其信号转导机制

发布时间：2021-08-13 18:43

　　目的明确脑外伤中,Dystroglycan（DG）是否和水通道蛋白4（Aquaporin4,AQP4）表达变化有关,明确AQP4的极性表达是否依赖于星形胶质细胞中细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinase,ERK）的激活以及DG是否参与了信号传导,并最终导致ERK通路的激活。方法用SD乳鼠脑组织星形胶质细胞进行培养,以离体划伤模型模拟在体的脑损伤。分别设立划伤组和对照组。用免疫荧光、免疫印迹及RT-PCR方法来检测划伤后各时间点（1h,6h,12h,24h）AQP4、DG和P-ERK等蛋白划伤后较正常组的表达变化。在所检测蛋白变化最明显的时间点,应用ERK的激动剂和抑制剂分别作用于划伤细胞后,用上述免疫化学方法检测各相关蛋白表达变化。在所检测的蛋白变化最显著的时间点,用siRNA沉默DG的表达,再在划伤模型中检测蛋白变化情况。结果划伤后,与正常组比较,AQP4和DG的共表达模式,从代表极性的点状,变为融合的大块状,表明AQP4的极性表达在划伤后1-6 h严重破坏;而1-6 h磷酸化ERK的表达明显增高（p<0.01）,且与AQP... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

免疫荧光标记GFAP鉴定星形胶质细胞Figure1IdentificationofastrocytesbyimmunofluorescencelabelingGFAP

212免疫荧光双标显示星形胶质细胞划伤后1h,6h,12h ,24h AQP4和α-DG表达改变（P4：AQP4，色荧光；α-D:α-DG，红色荧光；DAPI:蓝色荧光。1 N：1h 正常组，1S:1h 划伤组; 6N：h 正常组，6S:6h 划伤组; 12 N：12h 正常组，12S:12h 划伤组; 24 N：24h 正常组，24S:24h伤组）igure 2 Coexpression of AQP4 and α-DG at 1h，6h，12h，24h in astrocytes followingcratch-injurydetected by immunofluorescence

22图3免疫荧光双标显示星形胶质细胞划伤后1h,6h,12h ,24h AQP4和β-DG表达改变（P4：AQP4，绿色荧光；β-D: β-DG,红色荧光；DAPI:蓝色荧光。1 N：1h 正常组，1S:1h 划伤组; 6N：6h 正常组，6S:6h 划伤组; 12 N：12h 正常组，12S:12h 划伤组; 24 N：24h 正常组，24S:24h划伤组）Figure 3 Coexpression of AQP4 and β-DG at 1h，6h，12h，24h in astrocytes followingscratch-injury detected by immunofluorescence3.3 PCR 结果RT-PC 结果表明划伤后 AQP4 mRNA 表达较正常组比较明显增加（P＜0.01），

【参考文献】：
期刊论文
[1]Downregulation of Aquaporin 4 Expression through Extracellular Signal-regulated Kinases1/2 Activation in Cultured Astrocytes Following Scratch-injury[J]. SHI Zhong Fang,ZHAO Wei Jiang,XU Li Xin,DONG Li Ping,YANG Shao Hua,YUAN Fang.  Biomedical and Environmental Sciences. 2015(03)
[2]水通道蛋白4与神经系统疾病[J]. 陈志志,张淑坤,吴世政.  中国神经精神疾病杂志. 2014(10)
[3]ERK介导的AQP4对脑出血后早期脑水肿的影响[J]. 叶志军,衣服新,孟飞.  南昌大学学报(医学版). 2010(01)



本文编号：3340946