Aspirin调节氧化应激对椎间盘退变的影响及作用机制研究

发布时间：2021-08-20 13:27

　　目的:椎间盘退变（Intervertebral discdegeneration,IDD）是导致腰背痛的重要原因之一。相关研究表明,在IDD的病理性变化中活性氧分子增多,炎症因子过表达及细胞外基质丢失均是重要的诱因。阿司匹林（Aspirin）作为经典的非甾体类消炎药物之一,在临床应用中能够有效缓解各类疼痛及炎症。然而Aspirin能否通过减轻氧化应激来改善IDD的进程,目前并不清楚。本实验旨在研究Aspirin调节氧化应激对IDD的影响及作用机制,从而提出新的治疗策略。方法:无菌条件下分离Sprague Dawley（SD）大鼠尾椎椎间盘髓核组织,进行髓核细胞（Nucleus pulposus cells,NPCs）原代培养。应用脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS,1 μg/mL）诱导NPCs氧化应激后,分别向培养基中加入Aspirin（5μg/mL或25μg/mL）。依次检测活性氧（Reactive oxygen species,ROS）和炎症因子的表达、并通过实时荧光定量PCR、细胞免疫荧光染色技术来观察髓核细胞的退变程度。体内实验中,利用大鼠尾椎椎间盘穿刺模型诱... 

【文章来源】：苏州大学江苏省 211工程院校

【文章页数】：86 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１．１：?ＮＰＣｓ在倒置相差显微镜下形态??（Ａ）单个ＮＰＣｓ呈现梭形，（Ｂ）ＮＰＣｓ生长密度约８０％时的光镜形态

第一部分?Ａｓｐｉｒｉｎ调节氧化应激对椎间盘退变的影响及作用机制研究??胞增殖毒性实验结果显示：随时间（１、３、５ｄ）的增加，细胞增殖逐渐加快；与对照??组相比，ＬＰＳ浓度低于１０?ｐｇ／ｍＬ时不会对ＮＰＣｓ增殖产生不利影响；在１０?ｎｇ／ｍＬ或??１００?ｐｇ／ｍＬ浓度下ＮＰＣｓ，尽管增殖仍呈现随时间延长而増殖的趋势，但与对照组相??比，增殖能力明显受到抑制（图１．２）。??—?—??图１．１：?ＮＰＣｓ在倒置相差显微镜下形态??（Ａ）单个ＮＰＣｓ呈现梭形，（Ｂ）ＮＰＣｓ生长密度约８０％时的光镜形态。（比例尺：??４００?（ｉｍ）?〇??２?．５?１???—？?１?ＤＡＹ?３?ＤＡＹ?Ｋ３?５?ＤＡＹ??ｉｌｉｉｉｌｉｌｉｉｉｉｉｉ??ＬＰＳ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?（ｐｇ／ｍＬ）??图１．２：?ＣＣＫ８检测ＬＰＳ对ＮＰＣｓ的增殖毒性??ＮＰＣｓ?与不同浓度?ＬＰＳ?（０、０．０１、０．１、１、１０、１００?｜＿ｉｇ／ｍＬ）共培养不同天数（１、??３、５ｄ）。当ＬＰＳ浓度低于１０ｐｇ／ｍＬ对细胞增殖无影响。（＊Ｐ＜０．０５）。??２．?ＬＰＳ诱导ＮＰＣｓ氧化应激??经过上述实验，我们明确了使用ＬＰＳ的合理浓度范围。实验中我们分别选择不??同浓度ＬＰＳ?（０、０．０１、０．１、１昭／ｍＬ）处理ＮＰＣｓ，共两块２４孔板。在ＬＰＳ处理２４??ｈ后，应用荧光探针标记ＲＯＳ，第一块２４孔板上的ＮＰＣｓ在倒置荧光显微镜下观察??１２??

Ａｓｐｉｒｉｎ调节氧化应激对椎间盘退变的影响及作用机制研究?第一部分??可见：当ＬＰＳ浓度增加时，所标记的荧光强度及标记的细胞数量均呈现递增趋势（图??１．３?Ａ）。第二块２４孔板上的ＮＰＣｓ通过流式仪进行荧光强度量化分析，我们发现荧光??强度随ＬＰＳ浓度增加而增加（图１．３Ｂ）。随后我们应用ｌ＾ｇ／ｍＬ的ＬＰＳ选择不同的时??间（０、０．２５、０．５、１、３、６、１２、２４?ｈ）来处理ＮＰＣｓ，并再次通过流式细胞仪观察荧??光值来评估和量化氧化应激强度。结果显示：ＬＰＳ诱导的氧化应激呈现出明显的时间??依赖性，并在１２ｈ时达到最大值（图１．３Ｃ）。??接着我们通过Ｗｅｓｔｅｍ－ｂｌｏｔ实验观察蛋白水平的表达情况，结果显示．？相比对照??组，ＬＰＳ能够有效诱导ＮＰＣｓ产生ｉＮＯＳ和ＣＯＸ２两种氧化应激相关蛋白，并减少保??护性蛋白?Ｎｕｃｌｅａｒ?ｆａｃｔｏｒ－ｅｒｙｔｈｒｏｉｄ?２－ｒｅｌａｔｅｄ?ｆａｃｔｏｒ?２?（Ｎｒｆ－２）的表达（图?１．４?Ａ－Ｄ）。??Ｂ?Ｃ??Ｓ?Ｓ００！?ｆ?１０００－??？—?４５０－?Ｓ?．??ｇ?＊?？?８００－?ｊ??－ｉ?＿?卜??■?ＩＩ?Ｈａ??ｎｕ?ｍ?ｍ－ｍ?ｉ?：Ｕ＾ｉＵ??ｆ?＾?Ｋ?｜?０?、办?Ａ?爷??ＬＰＳ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?（ｐｇ／ｍＬ）?ＬＰＳ?ｃｕｌｔｕｒｅ?ｔｉｍｅ?（ｈｏｕｒ）??图１．３：?ＬＰＳ诱导ＮＰＣｓ氧化应激??（Ａ）倒置荧光显微镜下观察不同浓度ＬＰＳ诱导ＮＰＣｓ氧化应激。（Ｂ）流式细胞??１３??


本文编号：3353583