张力载荷下Wnt信号通路偶联在终板软骨细胞退变中的作用

发布时间：2021-08-20 23:00

　　目的:建立大鼠终板软骨细胞体外张力诱导退变模型,探讨Wnt信号通路与Ecadherin/β-catenin复合体偶联在张力诱导终板软骨细胞退变中的作用机制。方法:无菌条件下分离大鼠腰椎终板软骨,酶消化法提取终板软骨细胞,选择二代终板软骨细胞,采用FX-5000细胞应变加载系统建立体外终板软骨细胞张力载荷模型;采用特异性抑制剂调控wnt/β-catenin信号通路;通过基因转染过表达E-cadherin基因。Realtime RT-PCR及Western blot检测加力前后软骨软骨标志基因Ⅱ型胶原、蛋白多糖、Sox9、β-catenin、E-cadherin等基因及蛋白的表达变化;甲苯胺蓝染色及阿辛蓝染色观察加力前后软骨细胞的表型;分别采用AlamarBlue、流式细胞术及鬼笔环肽染色检测终板软骨细胞增殖、凋亡及细胞骨架的变化;免疫荧光检测β-catenin及E-cadherin在终板软骨细胞胞中的定位;通过核质分离实验检测β-catenin蛋白在终板软骨细胞质及细胞核中的表达;采用免疫共沉淀实验检测E-cadherin与β-catenin蛋白之间的相互作用。结果:张力加载后终板软骨细... 

【文章来源】：皖南医学院安徽省

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1张力载荷下终板软骨细胞细胞软骨标志基因的表达及软骨表型的改变：A：RealtimeRT-PCR检测张力加载前后终板软骨细胞中二型胶原（COL-2A）、蛋白聚糖(ACAN)及Sox9的表

张力刺激对终板软骨细胞增殖、凋亡及细胞骨架的影响。A：Alamar Blue 试验检测张荷下终板软骨细胞增殖的变化；B：ANEXIN V- PI 染色、流式细胞术分析张力加载前后终骨细胞凋亡的变化。C：鬼笔环肽染色、激光共聚焦显微镜下观察终板软骨细胞骨架（F-）的变化，红色为 F-actin,蓝色为细胞核。Ctrl:对照组 ICMT：加力组 （n ≥ 3，* P5）所有试验均重复 3 次以上。re 2：ICMT did not influence the cells apoptosis of end plate chondrocytes but altered celiferation and cytoskeleton.End plate chondrocytes were treated with 10% ICMT in vitro for 3. A：Cells proliferation was examined by Alamar Blue test B: Cells apoptosis was examinedI-ANEXIN V fluorescence in FACS analysis. C: Immunostaining of F-actin showed thge of chondrocytes cytoskeleton after 3 days’ ICMT treatment, red for F-actin and blue foI. Control (Ctrl) means no-loading, ICMT means mechanical tension application. Data werented as mean ± SD (n ≥ 3;* P < 0.05). All experiments were repeated at least three times.

结果发现张力加载后 TCF1 及 CyclinD1 基因的表达明显增高（详见图3E）。上述结果表明，张力刺激能够明显激活终板软骨细胞中 Wnt/β-catenin 信号通路，Wnt/β-catenin信号通路的激活可能与张力诱导终板软骨细胞退变相关。

【参考文献】：
期刊论文
[1]兔椎体软骨终板血管芽增龄性变化[J]. 徐宏光,陈小虎,王弘,王凌挺,陈学武.  中华骨科杂志. 2011 (04)
[2]Wnt signaling in disease and in development[J]. Roel NUSSE.  Cell Research. 2005(01)
[3]Sox9基因在终板软骨细胞退变模型中的表达变化及意义[J]. 徐宏光,赖必华,陈学武,靳松,王弘,刘平,王凌挺,黄德刚,毕富勇.  中华医学杂志. 2008 (37)



本文编号：3354369