miR-1271-5p调节TMBIM-6基因的表达促进乳腺癌细胞凋亡的机制研究
发布时间：2021-08-27 23:01
目的:分析比较miRNA-1271-5p在乳腺癌组织样本和细胞系中的表达水平,进而探讨miRNA-1271-5p在乳腺癌发生发展中的生物学功能和相关分子机制。材料和方法:为了筛选正常组织和乳腺癌组织中具有差异表达的miRNA,首先在癌症基因组图谱（TCGA）组织样本数据库中进行分析筛选,而后对54对腺癌组织及邻近的正常组织样本采用实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测验证。在得出的miRNA-1271-5p相对表达量结果中,miRNA-1271-5p在乳腺癌样本中较正常组织样本表达降低近50%。使用EdU细胞增殖检测、单克隆形成实验评价miRNA-1271-5p对增殖能力的影响,使用流式细胞术（FCM）评价对凋亡进程的影响。通过裸鼠异种移植模型皮下成瘤实验,观察体内miRNA-1271-5p对于肿瘤形成的影响。使用生物信息分析筛选乳腺癌中miRNA-1271-5p的潜在靶标,并通过荧光素酶报告基因实验、RT-qPCR和免疫印迹（Western Blot）实验进行验证。通过WB实验研究下游Calpain 1和Caspase 12信号转导通路参与介导细胞凋亡的相关进程。结果:1.miR...
【文章来源】：南京医科大学江苏省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
miR-1271-5p抑制肿瘤在体内的生长a裸鼠胁肋下注射28天后形成的肿瘤大小比较；b单个肿瘤质量均值的
p<0.05）；而 ZR-75-1-inhibitor 的凋亡率则显著低于 ZR-75-1-N.C.（图4b，p<0.05）。图 4：miR-1271-5p 对细胞凋亡的影响a 稳定过表达 miR-1271-5p 的 SUM1315 细胞凋亡率显著增高；b 稳定抑制 miR-1271-5p 的 ZR-75-1 细胞凋亡率显著降低。5 TMBIM6是miR-1271-5p的直接下游为了探究 miR-1271-5p 在乳腺癌中的作用机制，我们对 TCGA 数据库中1086 对乳腺癌组织进行相关分析，发现 miR-1271-5p 和 TMBIM6mRNA 的表达水平之间存在负相关（Pearson's 相关，r=-0.189，p<0.01）。由此我们采用双荧光素酶报告基因实验，以确定 TMBIM6 是否在乳腺癌中是 miR-1271-5p 的直接靶点。我们将具有结合位点的野生
6-mut）克隆到单独的 GV272 萤光素酶报道基因载体中（图5c）。将 miR-1271-5p 过表达(mimics)或阴性对照质粒分别与 TMBIM6-wt 或 TMBIM6-mut 序列载体共转染。结果发现，相比于对照组，在miR-1271-5p 过表达质粒和两种野生型 TMBIM6 3'UTR 序列载体（TMBIM6- wt1）共同转染 SUM1315 细胞时，荧光信号发生减弱；将野生型 TMBIM6 3'UTR 序列载体改为突变型序列载体时，荧光信号减弱程度降低。上述结果表明 TMBIM6 基因可能是 miR-1271-5p 的直接靶基因，并且其表达受 miR-1271-5p 的负性调控。图 5：miR-1271-5p 直接作用于 TMBIM6 的证据a 通过对 TCGA 数据库的分析发现，miR-1271-5p 与 TMBIM6 存在线性相关关系（Pearson 相关，负相关）；b miR-1271-5p 与 TMBIM-6 3’非翻译区存在互补配对的序?
【参考文献】：
期刊论文
[1]Current status of PI3K-mTOR inhibition in hormone-receptor positive, HER2-negative breast cancer[J]. Navid Sobhani,Daniele Generali,Fabrizio Zanconati,Marina Bortul,Bruna Scaggiante. World Journal of Clinical Oncology. 2018(08)
[2]Low levels of Bax inhibitor-1 gene expression increase tunicamycin-induced apoptosis in human neuroblastoma SY5Y cells[J]. Dan Wu1,Peirong Wang1,2,Shiyao Wang1 1Department of Medical Genetics,School of Basic Medical Sciences,Peking University,Beijing 100191,China 2Institute of Biophysics,Chinese Academy of Sciences,Beijing 100190,China. Neural Regeneration Research. 2012(17)
本文编号：3367271
【文章来源】：南京医科大学江苏省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
miR-1271-5p抑制肿瘤在体内的生长a裸鼠胁肋下注射28天后形成的肿瘤大小比较；b单个肿瘤质量均值的
p<0.05）；而 ZR-75-1-inhibitor 的凋亡率则显著低于 ZR-75-1-N.C.（图4b，p<0.05）。图 4：miR-1271-5p 对细胞凋亡的影响a 稳定过表达 miR-1271-5p 的 SUM1315 细胞凋亡率显著增高；b 稳定抑制 miR-1271-5p 的 ZR-75-1 细胞凋亡率显著降低。5 TMBIM6是miR-1271-5p的直接下游为了探究 miR-1271-5p 在乳腺癌中的作用机制，我们对 TCGA 数据库中1086 对乳腺癌组织进行相关分析，发现 miR-1271-5p 和 TMBIM6mRNA 的表达水平之间存在负相关（Pearson's 相关，r=-0.189，p<0.01）。由此我们采用双荧光素酶报告基因实验，以确定 TMBIM6 是否在乳腺癌中是 miR-1271-5p 的直接靶点。我们将具有结合位点的野生
6-mut）克隆到单独的 GV272 萤光素酶报道基因载体中（图5c）。将 miR-1271-5p 过表达(mimics)或阴性对照质粒分别与 TMBIM6-wt 或 TMBIM6-mut 序列载体共转染。结果发现，相比于对照组，在miR-1271-5p 过表达质粒和两种野生型 TMBIM6 3'UTR 序列载体（TMBIM6- wt1）共同转染 SUM1315 细胞时，荧光信号发生减弱；将野生型 TMBIM6 3'UTR 序列载体改为突变型序列载体时，荧光信号减弱程度降低。上述结果表明 TMBIM6 基因可能是 miR-1271-5p 的直接靶基因，并且其表达受 miR-1271-5p 的负性调控。图 5：miR-1271-5p 直接作用于 TMBIM6 的证据a 通过对 TCGA 数据库的分析发现，miR-1271-5p 与 TMBIM6 存在线性相关关系（Pearson 相关，负相关）；b miR-1271-5p 与 TMBIM-6 3’非翻译区存在互补配对的序?
【参考文献】：
期刊论文
[1]Current status of PI3K-mTOR inhibition in hormone-receptor positive, HER2-negative breast cancer[J]. Navid Sobhani,Daniele Generali,Fabrizio Zanconati,Marina Bortul,Bruna Scaggiante. World Journal of Clinical Oncology. 2018(08)
[2]Low levels of Bax inhibitor-1 gene expression increase tunicamycin-induced apoptosis in human neuroblastoma SY5Y cells[J]. Dan Wu1,Peirong Wang1,2,Shiyao Wang1 1Department of Medical Genetics,School of Basic Medical Sciences,Peking University,Beijing 100191,China 2Institute of Biophysics,Chinese Academy of Sciences,Beijing 100190,China. Neural Regeneration Research. 2012(17)
本文编号：3367271
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